Anti-HER2/ErbB2 monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie - P04626

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: HER2/ErbB2 Funktion und Lokalisierung

• Proteinidentität und Isoformen: Rezeptor-Tyrosin-Protein-Kinase erbB-2, auch bekannt als HER2, Neu, CD340 oder p185erbB2. Kodiert durch das ERBB2-Gen, fungiert es als kritischer Zelloberflächenrezeptor in Signaltransduktionswegen, die Zellwachstum und -differenzierung steuern.
• Kernnukleosom-/Chromatinfunktion: Nicht direkt ein Chromatinprotein, aber die HER2-Signalgebung beeinflusst Genexpressionsprogramme. Es ist eine wesentliche Komponente von Neuregulin-Rezeptor-Komplexen, obwohl Neureguline nicht direkt daran binden; stattdessen benötigt es einen Korezeptor für die Ligandeninteraktion. GP30 ist ein potenzieller Ligand.
• Mikrotubuli-Regulation: Bei Aktivierung löst HER2 den MEMO1-RHOA-DIAPH1-Signalweg aus, phosphoryliert und hemmt GSK3B. Dies verhindert die Phosphorylierung von APC und CLASP2, ermöglicht deren Membranassoziation und nachfolgende MACF1-Lokalisierung, die periphere Mikrotubuli einfängt und stabilisiert.
• Nukleare Funktionen: Translokiert in den Zellkern, wo es als Transkriptionsregulator wirkt. Bindet an die 5'-TCAAATTC-3'-Sequenz im PTGS2/COX-2-Promotor, um die Transkription zu aktivieren. Beteiligt sich auch an der STAT3- und SRC-abhängigen CDKN1A-Transkription und verstärkt die rRNA-Synthese über RNA Pol I, was die Proteinübersetzung und das Zellwachstum fördert.
• Subzelluläre Lokalisierung: Befindet sich an der Zellmembran, Membranausstülpungen (Ruffles), frühen Endosomen, im Zytoplasma (perinukleäre Region) und im Zellkern. Diese dynamische Verteilung spiegelt seine vielfältigen Rollen in der membrannahen Signalgebung und der nuklearen Genregulation wider.
• Gewebespezifität und Krankheitsassoziation: Exprimiert in verschiedenen Tumorgeweben, einschließlich primärer Brusttumore und Krebserkrankungen des Dünndarms, der Speiseröhre, der Niere und der Mundhöhle. Amplifikation/Überexpression ist ein Kennzeichen aggressiver Krebsarten, was HER2 zu einem wichtigen diagnostischen und therapeutischen Ziel macht.
• Wichtige posttranslationale Modifikationen und Schlüsselwörter: Enthält ein Signalpeptid, eine große extrazelluläre Domäne, eine Einzelpass-Transmembranhelix und eine intrazelluläre Tyrosinkinasedomäne. Stark glykosyliert mit Disulfidbrücken. Autophosphorylierung an Tyrosinresten ist entscheidend für die Kinaseaktivität. Schlüsselwörter umfassen ATP-Bindung, Kinase, Transferase, Glykoprotein, Phosphoprotein, Krankheitsvariante, Proto-Onkogen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein rekombinantes Protein gerichtet, das der extrazellulären Domäne (Aminosäuren 23‑652) von humanem HER2 entspricht, was ihn für den Nachweis von HER2 auf der Zelloberfläche mittels Durchflusszytometrie (FC) ohne Permeabilisierung geeignet macht. Erwägen Sie, den Antikörper zu titrieren, um das Signal-Rausch-Verhältnis für Ihr spezifisches Zellmodell zu optimieren.
• Für positive Kontrollen verwenden Sie HER2‑überexprimierende Zelllinien wie SK‑BR‑3 oder BT‑474. Validieren Sie die Färbung mit einer geeigneten Isotypkontrolle, um die Spezifität zu bestätigen.
• Wenn der intrazelluläre oder totale HER2-Nachweis erforderlich ist, beachten Sie, dass Fixierung und Permeabilisierung die Epitopzugänglichkeit verändern können. Validieren Sie den Antikörper unter Ihren Assay-Bedingungen und erwägen Sie die Lebendzellfärbung für ausschließlich oberflächliche Zielstrukturen.
• Die Kreuzreaktivität mit anderen Spezies als Mensch wurde nicht getestet. Wenn Sie mit nicht-humanen Proben arbeiten, bestätigen Sie die Reaktivität experimentell.
• Schließen Sie immer einen Viabilitätsfarbstoff ein, um tote Zellen auszuschließen, die die unspezifische Bindung erhöhen können.

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