Anti-HB-EGF Kaninchen-Polyklonalantikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q99075

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: HB-EGF-Funktion und -Lokalisation

• HB-EGF, auch als DTR (Diphtherie-Toxin-Rezeptor) bekannt, ist ein Mitglied der epidermalen Wachstumsfaktor (EGF)-Familie. Es wird als Typ-I-Transmembran-Vorläufer (proHB-EGF) synthetisiert, der anschließend gespalten wird, um einen löslichen Wachstumsfaktor freizusetzen, der die EGF-ähnliche Domäne enthält.
• Die lösliche Form von HB-EGF wirkt als potenter Ligand für EGFR, ERBB2 und ERBB4, mit einer höheren Affinität für EGFR als EGF selbst, und fungiert als potentes Mitogen für glatte Muskelzellen und Fibroblasten, jedoch nicht für Endothelzellen.
• HB-EGF ist für die normale Herzklappenbildung und Herzfunktion unerlässlich und fördert die Proliferation glatter Muskelzellen, was seine Rolle in der kardiovaskulären Entwicklung und Erkrankung unterstreicht.
• Über seine Wachstumsfaktoraktivität hinaus dient der transmembranöse proHB-EGF als Rezeptor für Diphtherietoxin und vermittelt dessen Eintritt in Zellen.
• Subzellulär lokalisiert proHB-EGF als Einzelpass-Transmembranprotein an der Zellmembran, während die gespaltene lösliche Form in den extrazellulären Raum sezerniert wird, was sowohl juxtakrine als auch parakrine Signalübertragung ermöglicht.
• Laut UniProt ist HB-EGF durch eine EGF-ähnliche Domäne, Heparin-bindende Motive und multiple Disulfidbindungen gekennzeichnet und durchläuft proteolytische Prozessierung, um den reifen Wachstumsfaktor zu erzeugen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 20-160 von humanem HB-EGF und deckt einen großen Teil der extrazellulären Domäne ab. Dieses Design zielt auf den löslichen Wachstumsfaktor und den Vorläufer ab und ermöglicht den Nachweis beider Formen in relevanten Anwendungen.
• Für Western Blot kann ein Band um 23 kDa beobachtet werden, was dem vorhergesagten Molekulargewicht des vollständigen Vorläufers entspricht. Je nach Probe können zusätzliche Bänder auftreten, die verarbeiteten Formen entsprechen.
• Bei der Immunfluoreszenz/ICC können Membran- und/oder zytoplasmatische Färbemuster beobachtet werden, die den Vorläufer und potenziell internalisierte oder sezernierte Formen widerspiegeln. Geeignete Kontrollen sowie Fixierungs- und Permeabilisierungsmethoden sollten validiert werden.
• Für ELISA sollte die Paarung dieses Antikörpers mit einem passenden Detektionsantikörper oder die Durchführung einer Standardtitration in Betracht gezogen werden, um die Empfindlichkeit und Spezifität für den Zielanalyten zu optimieren.
• Es wird über Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-HB-EGF berichtet; die experimentellen Bedingungen sollten jedoch für jede Spezies und Anwendung validiert werden, da die Reaktivität variieren kann.

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