Monoklonaler Anti-GSK-3α/β-Antikörper für WB, IF/ICC, IF-P, IHC-P, ELISA – P49840/P49841

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von GSK-3α/β

• GSK-3α und GSK-3β sind konstitutiv aktive Serin/Threonin-Kinasen, die die Glykogensynthase (GYS1/GYS2) phosphorylieren und inaktivieren und dadurch die Glykogensynthese sowie die Glukosehomöostase negativ regulieren.
  Verwandte Referenzen: PMID:11749387, PMID:17478001, PMID:19366350
• Sie spielen eine zentrale Rolle im Wnt/β-Catenin-Signalweg, indem sie β-Catenin (CTNNB1) phosphorylieren, dessen Ubiquitinierung und proteasomalen Abbau fördern und dadurch die Transkription von Wnt-Zielgenen hemmen.
  Verwandte Referenzen: PMID:17229088
• GSK-3α trägt zur Pathogenese der Alzheimer-Krankheit bei, indem es die Verarbeitung des Amyloidvorläuferproteins (APP) und die Bildung neurotoxischer Amyloidplaques fördert.
  Verwandte Referenzen: PMID:12761548
• Die Kinasen sind an der Insulinsignalübertragung beteiligt: Sie können die Entwicklung einer Insulinresistenz vermitteln, indem sie Transkriptionsfaktoren regulieren, die Stoffwechselgene kontrollieren.
  Verwandte Referenzen: PMID:10868943, PMID:17478001
• GSK-3α reguliert die Autophagie, indem es unter Hungerbedingungen die Acetyltransferase KAT5/TIP60 phosphoryliert, die wiederum wichtige Autophagieproteine wie ULK1 und RUBCNL acetyliert und aktiviert.
  Verwandte Referenzen: PMID:30704899
• Beide Isoformen besitzen eine N-terminale Kinasedomäne mit ATP-Bindungs- und Nukleotidbindungsstellen. Ihre Aktivität wird durch vorgeschaltete Kinasen über die Phosphorylierung spezifischer N-terminaler Serinreste moduliert (Ser21 für GSK-3α, Ser9 für GSK-3β). Eine Fehlregulation steht mit Diabetes, Neurodegeneration und Krebs in Verbindung.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Beim Western Blot sind in Zell- oder Gewebelysaten von Mensch, Maus oder Ratte Banden bei etwa 46 kDa (GSK-3α) und 48 kDa (GSK-3β) zu erwarten. Verwenden Sie standardmäßige SDS-PAGE sowie Nitrocellulose- oder PVDF-Membranen.
• Bei Immunfluoreszenz (IF/ICC) und Immunhistochemie (IHC) permeabilisieren Sie die Zellen bzw. entparaffinieren Sie die Gewebe und führen Sie eine geeignete Antigen-Retrieval-Behandlung durch, da GSK-3α/β überwiegend im Zytoplasma lokalisiert ist, aber auch in den Zellkernen vorkommen kann. Validieren Sie die Signalspezifität mit bekannten positiven und negativen Kontrollen.
• Für ELISA kann ein Sandwich-Format in Betracht gezogen werden, bei dem dieser Fangantikörper mit einem Detektionsantikörper kombiniert wird, der ein anderes Epitop erkennt. Titrieren Sie die Antikörperkonzentrationen, um das Signal-Rausch-Verhältnis zu optimieren.
• Das rekombinante Protein als Immunogen deutet darauf hin, dass der Antikörper sowohl phosphorylierte als auch unphosphorylierte Formen erkennen kann. Überprüfen Sie die Erkennung des gewünschten Modifikationszustands, indem Sie die Proben mit Modulatoren behandeln (z. B. Insulin oder Wnt3a zur Induktion der Phosphorylierung oder Phosphatasehemmer zur Erhaltung endogener Zustände).
• Eine Kreuzreaktivität mit Orthologen von Maus und Ratte wurde berichtet. Bestätigen Sie jedoch stets die Reaktivität in Ihrem spezifischen Modellsystem, da Expressionsniveaus und posttranslationale Modifikationen variieren können.

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