Anti-GSDMD (Gesamtlänge+N-Terminus) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P57764

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Gasdermin-D

• Gasdermin-D (GSDMD) ist ein Mitglied der Gasdermin-Familie, alternativ Gasdermin-Domain-haltiges Protein 1 genannt, kodiert durch das GSDMD-Gen (auch bekannt als DFNA5L, GSDMDC1, FKSG10). Es fungiert hauptsächlich als Vorstufe eines porenformenden Proteins, das für Pyroptose und Wirtsabwehr gegen Pathogene unerlässlich ist.
• Bei kanonischer oder nicht-kanonischer Inflammasom-Aktivierung spalten entzündliche Caspasen (CASP1, CASP4, CASP5) GSDMD und setzen die N-terminale porenformende Fragment aus der Autoinhibition frei.
  Verwandte Referenzen: PMID:26375003 PMID:26375259 PMID:27418190
• Das freigesetzte N‑terminale Fragment transloziert zur Plasmamembran, bindet stark an Phosphoinositide (z. B. PI4P, PI(4,5)P2), Phosphatidsäure und Phosphatidylserin, aber nicht an ungeladene Phospholipide, wo es zu 10–15 nm Poren oligomerisiert.
  Verwandte Referenzen: PMID:27281216 PMID:29898893 PMID:36227980
• Diese Poren vermitteln die Freisetzung von reifem IL‑1β und IL‑18, Zytokinen, die für die Entzündungsreaktion kritisch sind, und können auch reifes Caspase‑7 und mitochondriale DNA (mtDNA) freisetzen.
  Verwandte Referenzen: PMID:27281216 PMID:27418190 PMID:29898893
• In einigen Zelltypen folgt der pyroptotische Zelltod über die nachgeschaltete Aktivierung von Ninjurin‑1 (NINJ1), was zum Zerreißen der Plasmamembran führt.
  Verwandte Referenzen: PMID:33472215 PMID:37198476
• Über seine lytische Rolle hinaus können N‑terminale Fragmente von GSDMD extrazelluläre Gram‑negative und Gram‑positive Bakterien direkt abtöten und unter Zellkulturbedingungen intrazelluläre Pathogene wie Listeria monocytogenes einschränken.
  Verwandte Referenzen: PMID:27281216
• Im Dünndarm erzeugt die Spaltung durch CASP3 oder CASP7 einen transkriptionellen Koaktivator, der in den Kern transloziert, sich mit STAT1 zusammenschließt, um CIITA und MHC-Klasse-II-Expression zu induzieren und so die Nahrungstoleranz aufrechtzuerhalten. (Aufgrund von Ähnlichkeit)
• Die Spaltung durch das Papain-Allergen erzeugt ebenfalls das porenformende N‑terminale Fragment, das spezifisch reifes IL‑33 freisetzt und die Typ-2-Immunität fördert.
  Verwandte Referenzen: PMID:35794369
• GSDMDMD ist weit verbreitet exprimiert, mit bemerkenswerter Präsenz in suprabasalen Ösophaguszellen sowie dem gastrischen Isthmus/Hals, der Grube und Drüse, und lokalisiert unter verschiedenen Bedingungen im Zytoplasma, Inflammasom, Plasmamembran, Mitochondrien und Kern.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting erkennt der Antikörper ein Epitop innerhalb der Aminosäuren 154–252 der N‑terminalen Domäne; daher können sowohl die volle Länge von GSDMD (vorhergesagt ~53 kDa) als auch das gespaltene N‑terminale Fragment (~31–34 kDa) nachgewiesen werden. Validieren Sie dies im relevanten Probenystem und erwägen Sie die Verwendung von Inflammasom-aktivierten Zelllysaten, um Spaltprodukte zu beobachten.
• Bei Immunfluoreszenz/Immunzytochemie kann sich GSDMD je nach Aktivierungszustand im Zytoplasma, der Plasmamembran und dem Kern lokalisieren. Eine Optimierung der Permeabilisierungs- und Fixierungsbedingungen wird empfohlen. Fügen Sie geeignete Kontrollen hinzu, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für ELISA ermöglicht die polyklonale Natur die potenzielle Verwendung sowohl als Erfassungs- als auch als Nachweisantikörper in Sandwich-ELISA-Formaten. Die Kombination mit einem monoklonalen Antikörper, der spezifisch für ein anderes Epitop ist, kann die Empfindlichkeit verbessern. Eine Standardkurve unter Verwendung von rekombinantem Protein wird empfohlen.

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