Anti-Granzyme B polyklonaler Antikörper für WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P10144

Kernspezifikationen und Parameter des Produkts

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Granzyme B

• Granzyme B, auch bekannt als C11, CTLA-1, Cathepsin G-like 1 (CTSGL1), Fragmentin-2 und HLP, ist eine Serinprotease, die beim Menschen vom GZMB-Gen kodiert wird. Es ist ein Schlüsselbestandteil der Granula zytotoxischer T-Zellen und NK-Zellen.
• Diese Protease spaltet spezifisch nach Asparaginsäureresten, eine Substratpräferenz, die sie mit Caspasen teilt, was ihr ermöglicht, mehrere nachgeschaltete Todeswege zu aktivieren. Zugehörige Referenzen: PMID:1985927, PMID:8258716
• Nach der durch die immunologische Synapse vermittelten Abgabe in Zielzellen spaltet Granzyme B direkt Gasdermin-E (GSDME) und setzt dessen porenbildende Domäne frei, um Pyroptose auszulösen, eine hochgradig entzündliche Form des programmierten Zelltods. Zugehörige Referenzen: PMID:31953257, PMID:32188940
• Granzyme B aktiviert zudem proteolytisch Caspase-3, -9 und -10 und verknüpft so die durch Granula-Exozytose vermittelte Zytotoxizität mit der klassischen Apoptose-Ausführung. Zugehörige Referenzen: PMID:9852092
• Im Kontext bakterieller Infektionen kann Granzyme B Caspase-7 (CASP7) spalten und aktivieren, um die Reparatur der Plasmamembran zu erleichtern – eine Funktion, die aus der Sequenzähnlichkeit abgeleitet wurde.
• Subzellulär wird Granzyme B in zytolytischen Granula gespeichert und aus diesen sezerniert; es enthält ein N-terminales Signalpeptid und durchläuft eine Zymogen-Aktivierung, bevor es seine volle proteolytische Aktivität erlangt.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören N-Glykosylierung und die Bildung von Disulfidbrücken, die beide entscheidend für die korrekte Faltung, den Transport und die Stabilität sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das den humanen Granzyme B-Resten 100–200 entspricht. Dies führt wahrscheinlich zu einem Antikörper, der ein lineares Epitop erkennt, was ihn sehr gut für denaturierende Anwendungen wie WB geeignet macht.
• Für WB sollte die Detektion einer Hauptbande bei etwa 28kDa unter reduzierenden Bedingungen in Betracht gezogen werden, was dem Zymogen oder dem reifen Granzyme B entspricht. Zwischenprodukte der Prozessierung können bei niedrigeren Molekulargewichten auftreten.
• Aufgrund der Kreuzreaktivität mit Maus-Granzyme B kann der Antikörper in Mausgewebe- oder Zellmodellen verwendet werden, jedoch sollten Anwender die spezies-spezifische Leistung in ihrem experimentellen System validieren.
• Optimieren Sie bei IHC-P und IF-P die Antigen-Demaskierung und die Antikörperverdünnung, da das Peptid-Epitop empfindlich auf Fixierungs- und Einbettungsbedingungen reagieren kann.
• Für ELISA können direkte Bindungs- oder Sandwich-Formate vorläufige Paarungstests erfordern; die polyklonale Natur kann die Signalverstärkung unterstützen, aber bei unsachgemäßer Titration auch den Hintergrund erhöhen.

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