Anti-GOT2 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P00505

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: GOT2-Funktion und Lokalisierung

• GOT2, auch bekannt als mitochondriale Aspartat-Aminotransferase, Kynurenin-Aminotransferase 4 (KAT4) oder plasmamembran-assoziertes Fettsäure-bindendes Protein (FABPpm), wird beim Menschen durch das GOT2-Gen kodiert. Es gehört zur Familie der pyridoxalphosphatabhängigen Aminotransferasen der Klasse I.
• Als Schlüsselenzym des Malat-Aspartat-Shuttles ist GOT2 für die Aufrechterhaltung des intrazellulären NAD(H)-Redoxgleichgewichts unerlässlich, indem es den Transfer von Reduktionsäquivalenten über die Mitochondrienmembran erleichtert.
• GOT2 katalysiert die irreversible Transaminierung von L-Kynurenin zu Kynurensäure (KA), einem neuroaktiven Metaboliten, und verknüpft es damit mit der Modulation des Kynureninwegs und neurologischen Prozessen.
• Das Enzym spielt auch eine Rolle bei der zellulären Aufnahme langkettiger Fettsäuren durch seine Identität als FABPpm an der Plasmamembran und trägt so zum Lipidtransport bei.
• GOT2 ist hauptsächlich in der mitochondrialen Matrix lokalisiert; jedoch wird ein Bruchteil auch an der Zellmembran nachgewiesen, was seiner dualen Funktion im mitochondrialen Stoffwechsel und bei der Fettsäureaufnahme entspricht.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung, Methylierung, Nitrierung und Phosphorylierung, die seine Aktivität und subzelluläre Verteilung regulieren können. Das Protein wird mit einem mitochondrialen Transitpeptid synthetisiert, das gespalten wird, um die reife Form zu ergeben.
• Mutationen im GOT2-Gen sind mit der Entwicklungs- und epileptischen Enzephalopathie 82 (DEE82) verbunden, was seine kritische Rolle im Hirnstoffwechsel unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Resten 30–200 von humanem GOT2, einem Bereich, der das N-terminale Segment des reifen mitochondrialen Proteins nach der Spaltung des Transitpeptids umfasst. Dieses Design kann die Erkennung der endogenen, verarbeiteten Form in den Mitochondrien begünstigen.
• Für Western-Blot-Anwendungen sollten Sie eine Anreicherung mitochondrialer Fraktionen in Betracht ziehen, um das Signal-Rausch-Verhältnis zu verbessern, da GOT2 überwiegend mitochondrial ist. Das vorhergesagte Molekulargewicht des Vorläufers beträgt ~47,5 kDa, während das reife Protein bei etwa 48 kDa wandert.
• Validieren Sie in der Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) die Detektion in Geweben oder Zellen mit hoher metabolischer Aktivität (z. B. Leber, Herz, Gehirn), wo die GOT2-Expression reichlich ist. Optimieren Sie die Permeabilisierung und die Antigen-Retrieval-Schritte, um den Zugang zu mitochondrialen Epitopen sicherzustellen.
• Verwenden Sie für ELISA rekombinantes GOT2 oder Gewebelysate als Standard, um die Empfindlichkeit und Spezifität des Assays zu ermitteln. Eine Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-GOT2 wurde beobachtet, was es für translationsrelevante Modelle geeignet macht.

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