Anti-GIF-Kaninchen-Polyklonalantikörper für WB, ELISA – P27352

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: GIF-Funktion und -Lokalisation

• Das vom CBLIF-(GIF)-Gen kodierte Protein ist der gastrische Intrinsic Factor (IF), auch als Cobalamin-bindender Intrinsic Factor bekannt, der für die Aufnahme von Vitamin B12 (Cobalamin) unerlässlich ist.
• GIF ist ein von Zellen der Magenschleimhaut, insbesondere von Belegzellen, sezerniertes Glykoprotein und wird als Vorläuferprotein mit einem Signalpeptid produziert.
• Funktionell bindet GIF freies Cobalamin im Magen. Nach der proteolytischen Spaltung im Duodenum interagiert der stabile GIF-Cobalamin-Komplex mit dem Cubilin-(CUBN)-Rezeptor im Ileum und ermöglicht dadurch die rezeptorvermittelte Endozytose zur Aufnahme von Vitamin B12.
• Das GIF-Gen unterliegt alternativem Spleißen und erzeugt mehrere Isoformen. Krankheitsassoziierte Varianten in CBLIF verursachen einen Intrinsic-Factor-Mangel (IFD), der aufgrund der beeinträchtigten B12-Aufnahme zu perniziöser Anämie führt.
• GIF ist ein Phosphoprotein mit mehreren Disulfidbindungen, die für seine Struktur und Funktion entscheidend sind, und gehört zu einer Gruppe von Proteinen, die am Kobalt- und Ionentransport beteiligt sind.
• Die Gewebeexpression ist hochspezifisch für die Magenschleimhaut, was mit seiner Rolle bei der gastrointestinalen Vitaminaufnahme übereinstimmt.
• Zu den mit diesem Protein verbundenen Schlüsselbegriffen gehören Krankheitsvariante, Glykoprotein, sezerniert, Signal und Transport, was seine klinische und funktionelle Bedeutung hervorhebt.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das verwendete Immunogen ist ein rekombinantes Protein, das die Aminosäuren 19–417 des humanen GIF umfasst und dem reifen Protein ohne Signalpeptid entspricht. Dies deutet darauf hin, dass der Antikörper die endogene sezernierte Form erkennen kann.
• Für den Western Blot sollte ein Vergleich zwischen reduzierenden und nicht reduzierenden SDS-PAGE-Bedingungen in Betracht gezogen werden, da die mehreren Disulfidbindungen von GIF die elektrophoretische Mobilität beeinflussen können.
• Angesichts der gewebespezifischen Expression in der Magenschleimhaut sollte der Antikörper in Magenlysaten von Mensch, Maus oder Ratte validiert werden. Als Spezifitätskontrolle kann ein negatives Gewebe wie Leber verwendet werden.
• Im ELISA kann dieser polyklonale Antikörper als Fang- oder Detektionsreagenz untersucht werden. Für einen Sandwich-ELISA wird zur Verbesserung der Spezifität die Kombination mit einem monoklonalen Anti-GIF-Antikörper empfohlen.
• Da GIF ein sezerniertes Protein ist, können bei der Analyse von Zell- oder Gewebekulturüberständen Konzentrationsschritte erforderlich sein, um endogene Mengen mittels WB oder ELISA nachzuweisen.
• Da eine Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte berichtet wird, sollten die Epitopkonservierung und die Testleistung in diesen Spezies mithilfe geeigneter Positivkontrollen überprüft werden.

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