Monoklonaler Anti-GCLC-Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA – P48506

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von GCLC

• GCLC, auch als schwere Kette von GCS, Gamma-ECS oder Gamma-Glutamylcystein-Synthetase bekannt, ist die katalytische Untereinheit der Glutamat-Cystein-Ligase (GCL).
• Es katalysiert die ATP-abhängige Verknüpfung von L-Glutamat und L-Cystein, den ersten und geschwindigkeitsbestimmenden Schritt der Glutathion-(GSH-)Biosynthese, einem entscheidenden antioxidativen Stoffwechselweg.
• Zusammen mit der regulatorischen Untereinheit GCLM bildet GCLC das heterodimere GCL-Holoenzym, das für die Aufrechterhaltung der zellulären Redox-Homöostase unerlässlich ist.
• Schlüsselwörter weisen darauf hin, dass GCLC einer Acetylierung und Phosphorylierung unterliegt, was auf eine Regulation durch posttranslationale Modifikationen hindeutet.
• Mutationen in GCLC werden mit hereditärer hämolytischer Anämie aufgrund eines Glutathionmangels in Verbindung gebracht, was seine klinische Bedeutung unterstreicht.
• GCLC enthält eine ATP-bindende Domäne, was mit seiner Funktion als Ligase übereinstimmt, die ATP für die Glutathionsynthese nutzt.
• Es ist Bestandteil des Referenzproteoms und wurde in mehreren Proteomikstudien identifiziert, was seine ubiquitäre Expression bestätigt.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die N-terminale Region (Aminosäuren 1–135) des humanen GCLC, eine Region, die über verschiedene Spezies hinweg konserviert sein kann, was mit der beobachteten Kreuzreaktivität mit Maus übereinstimmt.
• Für den Western Blot (WB) sollte eine Optimierung der Verdünnung des Primärantikörpers in Betracht gezogen und die Validierung mit positiven und negativen Kontrolllysaten, die GCLC exprimieren, durchgeführt werden.
• Bei der Immunfluoreszenz/Immunzytochemie (IF/ICC) ist auf geeignete Fixierungs- und Permeabilisierungsmethoden zu achten, die für den jeweiligen Zelltyp geeignet sind; die Verwendung von Isotypkontrollen wird empfohlen.
• Für ELISA sollte der Antikörper gegen rekombinantes GCLC oder natives Protein in Zell- bzw. Gewebelysaten getestet werden; eine Schachbrett-Titration kann dabei helfen, die optimalen Konzentrationen von Antikörper und Antigen zu bestimmen.
• Aufgrund der Kreuzreaktivität mit Maus kann dieser Antikörper für translationale Studien in Nagetiermodellen geeignet sein; eine Validierung in der relevanten Spezies wird empfohlen.
• Es sollten stets geeignete Kontrollen (z. B. Knockout-Proben oder siRNA-Knockdown) einbezogen werden, um die Spezifität im jeweiligen experimentellen System zu bestätigen.

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