Anti-Furin-monoklonaler Antikörper für WB und ELISA – P09958

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Furin

• Furin (PCSK3) ist eine calciumabhängige Serin-Endoprotease, die zur Familie der Proprotein-Konvertasen gehört und auch als „paired basic amino acid residue-cleaving enzyme“ (PACE) sowie als Dibasik-verarbeitendes Enzym bekannt ist.
• Furin erkennt und spaltet Polypeptidvorstufen an der Konsensussequenz RX(K/R)R und spielt eine entscheidende Rolle bei der Proprotein-Reifung innerhalb des konstitutiven sekretorischen Weges. Zugehörige Referenzen: PMID:11799113, PMID:1629222, PMID:1713771
• Es verarbeitet wichtige Proteine wie den transformierenden Wachstumsfaktor Beta 1 (TGFB1) und das Prohormon des natriuretischen Faktors des Gehirns und wandelt sie in ihre aktiven Formen um. Zugehörige Referenzen: PMID:7737999, PMID:20489134, PMID:21763278
• Furin zirkuliert zwischen dem trans-Golgi-Netzwerk, der Zelloberfläche und den Endosomen und wird auch in löslicher Form sezerniert.
• Das Protein durchläuft eine autokatalytische Spaltung zur Bildung des aktiven Enzyms und enthält Disulfidbrücken sowie Glykosylierungs- und Phosphorylierungsstellen, die seine Funktion regulieren.
• Furin wird ubiquitär in menschlichen Geweben exprimiert, was seine zentrale Rolle bei der Verarbeitung einer Vielzahl sezernierter und membranständiger Proteine widerspiegelt.
• Furin wird von zahlreichen Krankheitserregern zur Aktivierung ihrer Oberflächenproteine genutzt, darunter HIV-1-gp160, Influenza-Hämagglutinin und das Spike-Protein von SARS-CoV-2, wodurch es zu einem Ziel der antiviralen Forschung wird.
• Durch die Verarbeitung der akzessorischen Untereinheit ATP6AP1 der V-ATPase reguliert Furin indirekt die Ansäuerung sekretorischer Granula in Inselzellen des Pankreas.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid aus den Aminosäuren 200–300; der Antikörper erkennt wahrscheinlich ein lineares Epitop und eignet sich daher für denaturierende Anwendungen wie den Western Blot. Für native Anwendungen wie ELISA sollte die Bindung unter nicht denaturierenden Bedingungen validiert werden.
• Im Western Blot ist für das Volllängen-Furin eine Bande bei etwa 87 kDa zu erwarten. Aufgrund der Proprotein-Verarbeitung können zusätzlich Banden auftreten, die der Proform und den reifen, gespaltenen Formen entsprechen.
• Die ubiquitäre Expression ermöglicht den Einsatz vieler Zelllinien als Positivkontrollen; beispielsweise können HeLa-, HEK293- oder A549-Zellen verwendet werden. Eine Kreuzreaktivität mit Maus ist angegeben, bei der Untersuchung anderer Spezies sollte jedoch die Sequenzhomologie in der Immunogenregion überprüft werden.
• Für ELISA sollten die Beschichtungsbedingungen und Antikörpertiter optimiert werden, da das Peptid-Immunogen die Erkennung des nativen Proteins beeinflussen kann.

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