Anti-FTO-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, IP, ELISA – Q9C0B1

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: FTO-Funktion und -Lokalisation

• FTO (mit Fettmasse und Adipositas assoziiertes Protein) ist eine α-Ketoglutarat-abhängige Dioxygenase, die als RNA-Demethylase fungiert und die oxidative Demethylierung von N6-Methyladenosin (m6A) in mRNA, U6-snRNA und der 5'-Cap-Modifikation m6A(m) katalysiert. Zugehörige Referenzen: PMID:22002720, PMID:25452335, PMID:26457839, PMID:30197295, PMID:28002401
• Es demethyliert außerdem N1-Methyladenin in tRNAs und kann alkylierte DNA/RNA in vitro reparieren, wobei die Relevanz in vivo unklar ist. Zugehörige Referenzen: PMID:30197295, PMID:18775698, PMID:20376003
• Durch die Modulation der m6A-Spiegel reguliert FTO die mRNA-Stabilität, das Spleißen und die Translation und beeinflusst dadurch die Adipogenese, das Körpergewicht und die Energiehomöostase. Zugehörige Referenzen: PMID:18775698, PMID:26287746
• FTO wird ubiquitär exprimiert, wobei die höchsten Konzentrationen in den Nebennieren und im Gehirn (insbesondere im Hypothalamus und in der Hypophyse) vorliegen; außerdem ist es bei bestimmten akuten myeloischen Leukämien (AML) mit spezifischen genetischen Rearrangements überexprimiert. Zugehörige Referenzen: PMID:17434869, PMID:17496892, PMID:28017614
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst den Zellkern (mit Anreicherung in nukleären Speckles) und das Zytoplasma, was seine Funktionen bei der RNA-Prozessierung und Translation widerspiegelt.
• FTO gehört zur ALKBH-Familie der Dioxygenasen und enthält eine Eisen- und 2-Oxoglutarat-bindende Domäne, die für seine katalytische Aktivität essenziell ist.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Acetylierung, Phosphorylierung und Ubiquitin-ähnliche Konjugation, die seine Stabilität und Aktivität regulieren können.
• FTO wirkt bei AML als Onkogen, indem es die mRNAs leukämogener Faktoren wie MYC und CEBPA demethyliert und stabilisiert. Zugehörige Referenzen: PMID:28017614, PMID:29249359

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 327–504 (C-terminale Region) des humanen FTO. Es wird erwartet, dass dieser polyklonale Antikörper mehrere Epitope erkennt und dadurch eine robuste Detektion unter denaturierenden und nativen Bedingungen ermöglicht.
• Beim Western Blot (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht etwa 58 kDa. Validieren Sie die Expression in Lysaten positiver Kontrollen (z. B. Gehirn- oder AML-Zelllinien) und erwägen Sie die Verwendung von Phosphataseinhibitoren, um Phosphorylierungszustände zu erhalten.
• Bei der Immunpräzipitation (IP) kann der Antikörper FTO-RNA-Komplexe erfassen. Verwenden Sie eine Vernetzung oder RNase-freie Bedingungen, wenn RNA-Protein-Wechselwirkungen erhalten bleiben sollen.
• Bestätigen Sie beim ELISA die Spezifität durch Beschichtung mit rekombinantem FTO und kompetitive Inhibitionsassays. Die angegebene Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte ermöglicht Studiendesigns mit mehreren Spezies.
• Beim Vergleich der Expression zwischen Geweben oder Behandlungen sollten Sie eine gleiche Beladung bestätigen und die dynamische Regulation von FTO durch Stoffwechsel- und Stresssignalwege berücksichtigen.

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