Kaninchen-monoklonaler Anti-FTO-Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA – Q9C0B1

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: FTO-Funktion und Lokalisation

• FTO (Fat-mass- und Adipositas-assoziiertes Protein) ist eine von Alpha-Ketoglutarat abhängige Dioxygenase, die als RNA-Demethylase fungiert. FTO, auch als ALKBH9 bekannt, gehört zur AlkB-Familie der Dioxygenasen.
• Es vermittelt die oxidative Demethylierung von N6-Methyladenosin (m6A) in mRNA, der häufigsten internen Modifikation bei höheren Eukaryoten, und reguliert dadurch die mRNA-Expression und -Stabilität. Verwandte Referenzen: PMID:22002720, PMID:25452335, PMID:26457839, PMID:30197295
• FTO demethyliert außerdem N6,2'-O-Dimethyladenosin (m6Am) in mRNA-Caps, beeinflusst die mRNA-Stabilität durch Förderung des Decappings und wirkt auf m6A in U6-snRNA. Verwandte Referenzen: PMID:28002401, PMID:30197295
• Es fungiert als tRNA-Demethylase, indem es N1-Methyladenin entfernt, und weist eine geringe Aktivität bei der Reparatur alkylierter DNA/RNA auf, obwohl seine In-vivo-Rolle bei der DNA-Reparatur ungewiss ist. Verwandte Referenzen: PMID:30197295, PMID:18775698, PMID:20376003
• Die subzelluläre Lokalisation ist vorwiegend nukleär, wobei FTO auch in nukleären Speckles und im Zytoplasma vorkommt.
• FTO wird ubiquitär exprimiert, mit hoher Expression in den Nebennieren, im Gehirn (Hypothalamus und Hypophyse), und ist bei bestimmten akuten myeloischen Leukämien mit spezifischen genetischen Veränderungen überexprimiert. Verwandte Referenzen: PMID:17434869, PMID:17496892, PMID:28017614
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Acetylierung, Phosphorylierung und ubiquitinähnliche Konjugation, die möglicherweise seine Aktivität und Stabilität regulieren.
• FTO spielt eine entscheidende Rolle bei der Regulation der Fettmasse, Adipogenese, des Körpergewichts und der Energiehomöostase und ist an der Thermogenese und der Differenzierung von Adipozyten beteiligt. Verwandte Referenzen: PMID:18775698, PMID:20376003, PMID:26287746
• Onkogene Rolle bei der akuten myeloischen Leukämie durch Demethylierung von m6A auf Transkripten von Onkogenen wie MYC, CEBPA, ASB2 und RARA, wodurch deren Expression gefördert wird. Verwandte Referenzen: PMID:28017614, PMID:29249359

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein Peptid aus der N-terminalen Region (AS 1–100), das möglicherweise FTO in voller Länge sowie einige Isoformen nachweisen kann. Verwenden Sie positive und negative Kontrollen (z. B. Lysate mit FTO-Überexpression oder mit siRNA behandelte Proben), um die Spezifität zu bestätigen.
• Für den Western Blot (WB) sollten reduzierte und denaturierte Proteinproben verwendet werden; die erwartete Bandengröße beträgt etwa 58 kDa. Verwenden Sie geeignete Ladekontrollen und Blockierungsbedingungen.
• Testen Sie bei IHC-P und IF/ICC verschiedene Fixierungs- und Antigen-Retrieval-Methoden. Paraffineingebettete Schnitte können eine hitzeinduzierte Epitop-Retrieval-Methode erfordern. Validieren Sie die Färbung anhand bekannter positiver Gewebe (Gehirn, Nebenniere) und schließen Sie Isotypkontrollen ein.
• Für die Immunpräzipitation (IP) kann der Antikörper zur Isolierung nativer FTO-Komplexe geeignet sein. Optimieren Sie die Bedingungen des Lysepuffers und die Antikörpermenge im Verhältnis zur Gesamtproteinmenge.
• Für ELISA kann der Antikörper sowohl in direkten als auch in Sandwich-Formaten eingesetzt werden. Optimieren Sie die Beschichtungs- und Detektionsbedingungen entsprechend den Anforderungen Ihres spezifischen Assays.

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