Anti-FOXO3A Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IF-P, ELISA - Q9WVH4

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: FOXO3A-Funktion und -Lokalisierung

• Forkhead box protein O3 (FOXO3A), auch bekannt als Fkhr2 oder Foxo3a, wird durch das Foxo3-Gen kodiert.
• FOXO3A ist ein transkriptioneller Aktivator, der an die konsensus-DNA-Sequenz 5'-[AG]TAAA[TC]A-3' bindet und Apoptose und Autophagie reguliert (PubMed:18054315, PubMed:18054316, PubMed:23805378). Verwandte Referenzen: PMID:18054315 PMID:18054316 PMID:23805378
• Es reguliert Autophagie im Skelettmuskel positiv durch Dephosphorylierung, Kerneintritt und Aktivierung von Autophagiegenen wie GABARAP1L und MAP1LC3B, was zu Proteolyse führt (PubMed:18054315, PubMed:18054316, PubMed:25402684). Verwandte Referenzen: PMID:18054315 PMID:18054316 PMID:25402684
• Als Reaktion auf metabolischen Stress transloziert FOXO3A zu Mitochondrien, um die mtDNA-Transkription zu fördern (PubMed:23283301). Verwandte Referenzen: PMID:23283301
• Das Protein pendelt zwischen Zytoplasma, Zellkern und Mitochondrien (Matrix und äußere Membran), wobei sich die Lokalisierung je nach zellulären Bedingungen ändert.
• Die Gewebeexpression umfasst weißes und braunes Fettgewebe, Leber, Niere, Lunge, Dickdarm und Skelettmuskel (PubMed:22510882, PubMed:29445193). Verwandte Referenzen: PMID:22510882 PMID:29445193
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung, Acetylierung, Methylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität und Stabilität regulieren.
• Darüber hinaus ist FOXO3A an der posttranskriptionellen Regulation von MYC über miR-34b/c beteiligt, fördert die chondrogene Festlegung von Skelettvorläuferzellen (PubMed:32103177) und treibt die Differenzierung regulatorischer T-Zellen durch Aktivierung von FOXP3 an. Verwandte Referenzen: PMID:32103177

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die Aminosäuren 371–470 von Maus-FOXO3A umfasst; die resultierenden polyklonalen Antikörper können mehrere Epitope erkennen, was sie gut für denaturierende Western-Blot-Analysen geeignet macht, bei denen linearisierte Epitope exponiert sind.
• Bei WB ist ein Band bei etwa 71 kDa zu erwarten; Phosphorylierung und andere Modifikationen können jedoch zu Bandenverschiebungen oder zusätzlichen Banden führen, daher sollten geeignete Kontrollen und gegebenenfalls Phosphatase-Inhibitoren zur Validierung verwendet werden.
• Für IF/ICC und IF-P sollten Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen optimiert werden, um den Antikörperzugang zu den nukleären und zytoplasmatischen Kompartimenten zu gewährleisten, in denen FOXO3A lokalisiert ist.
• Für ELISA kann dieser Antikörper entweder als Fänger- oder Detektionsreagenz betrachtet werden, Anwender sollten jedoch Schachbretttitrationen durchführen, um optimale Arbeitskonzentrationen zu bestimmen.
• Die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte wurde bestätigt; Reaktionen mit anderen Spezies sollten experimentell verifiziert werden.

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