Anti-FMRP monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - Q06787

Kernproduktschreibweise und Parameter

Biologischer Hintergrund: FMRP-Funktion und -Lokalisierung

• FMRP (Fragile X messenger ribonucleoprotein 1), codiert durch das FMR1-Gen, ist ein multifunktionelles, mit Polyribosomen assoziiertes RNA-bindendes Protein, das für die neuronale Entwicklung und synaptische Plastizität entscheidend ist. Es reguliert alternatives mRNA-Spleißen, mRNA-Stabilität, dendritischen Transport und lokale Proteinsynthese an Synapsen. Verwandte Referenzen: PMID:12417522 PMID:16631377 PMID:18653529 PMID:30765518 PMID:31439799 PMID:11157796 PMID:11532944 PMID:12594214
• Fungiert sowohl als translationaler Repressor als auch als Aktivator von Ziel-mRNAs. An Synapsen reprimiert es typischerweise die Translation über den CYFIP1-EIF4E-FMR1-Komplex und durch die Bildung von phasengetrennten Ribonukleoprotein-Granula, die die Translation hemmen. Bei Stimulation des metabotropen Glutamatrezeptors (mGluR) kann es jedoch die Translation einer Teilmenge dendritischer mRNAs aktivieren. Verwandte Referenzen: PMID:12417522 PMID:31439799 PMID:30765518 PMID:11157796 PMID:11532944 PMID:12594214
• Bindet an spezifische RNA-Motive, einschließlich G-Quadruplex-Strukturen, U-reiche Sequenzen und die Konsensussequenzen ACU[GU] und [AU]GGA, hauptsächlich innerhalb der kodierenden Sequenzen und 3'UTRs der Ziel-mRNAs. Es interagiert auch mit der nicht-kodierenden BC1-RNA und verschiedenen miRNAs. Verwandte Referenzen: PMID:23235829 PMID:11719189 PMID:18579868 PMID:25464849 PMID:12927206
• Lokalisiert extensiv im Zytoplasma, insbesondere an neuronalen Fortsätzen einschließlich Dendriten, Axonen, dendritischen Stacheln und Wachstumskegeln. Es wird in Ribonukleoprotein-Granula, Stress-Granula und an synaptischen Stellen (sowohl prä- als auch postsynaptisch) gefunden. Zur nukleären Lokalisierung gehören das Nukleolus, die Cajal-Körper und das Zentromer. Es assoziiert auch mit der Zellmembran.
• Post-translational modifiziert durch Acetylierung, Methylierung und Phosphorylierung (einschließlich Phasen-trennung-fördernder Phosphorylierung). Auch Ubiquitinierung wird festgestellt. Mutationen in FMR1 verursachen das Fragile-X-Syndrom (Intelligenzminderung) und vorzeitigen Ovarialausfall; das Protein ist mit Neurodegeneration verbunden.
• Zeigt gewebsspezifische Expression, hauptsächlich in Gehirn, Kleinhirn, Hoden und epithelialen Geweben. Auf Proteinebene in Neuronen, Purkinje-Zellen, Spermatogonien und Lymphozyten nachgewiesen.
• In vitro bindet FMRP bevorzugt an Poly(G)- und Poly(U)-RNA-Homopolymere. Verwandte Referenzen: PMID:12950170 PMID:15381419 PMID:7688265 PMID:24204304

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die Reste 1–100 von humanem FMRP (Q06787) abdeckt; daher wird erwartet, dass der Antikörper die N-terminale Region erkennt. Für Western Blot (WB) wird eine Bande bei ~71 kDa vorhergesagt; erwägen Sie die Verwendung von Lysaten aus Gehirn oder Hoden (hohe endogene Expression) als positive Kontrolle.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) kann eine optimale Färbung eine Antigen-Retrieval und sorgfältige Titrierung erfordern; eine Validierung in humanen, murinen oder rattigen neuronalen Geweben wird empfohlen.
• In ELISA kann das Peptid-Immunogen als Standard für quantitative Assays dienen; gepaart mit einem geeigneten Detektionsantikörper kann dieser Klon für die Entwicklung eines Sandwich-ELISA geeignet sein.
• Als Kaninchen-monoklonaler Antikörper bietet dieses Reagenz eine konsistente Charge-zu-Charge-Reproduzierbarkeit und hohe Affinität, aber jede neue Charge sollte im spezifischen Assayystem des Endanwenders validiert werden.

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