Anti-Flt3/CD135 monoklonaler Antikörper für FC, ELISA - P36888

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: FLT3-Funktion und -Lokalisierung

• FLT3 (Fms-like tyrosine kinase 3), auch bekannt als CD135, FLK2, STK1, ist ein Rezeptor-Tyrosin-Proteinkinase, der als Zelloberflächenrezeptor für das Zytokin FLT3LG wirkt und eine zentrale Rolle bei der Regulierung der Differenzierung, Proliferation und des Überlebens von hämatopoetischen Vorläuferzellen und dendritischen Zellen spielt.
• Nach der Ligandenbindung aktiviert FLT3 mehrere Downstream-Signalwege, einschließlich der Phosphorylierung von SHC1 und AKT1, der Aktivierung von mTOR, RAS-Signalisierung und MAPK/ERK-Kaskaden, wodurch das Zellwachstum gefördert und die Apoptose gehemmt wird.
• FLT3 ist ein Mitglied der Familie der Rezeptor-Tyrosinkinasen der Klasse III, gekennzeichnet durch einen extrazellulären Bereich mit fünf immunglobulinähnlichen Domänen, eine einzelne Transmembranhelix und eine intrazelluläre Kinasedomäne; alternatives Spleißen erzeugt Isoformen mit unterschiedlichen Eigenschaften.
• Subzellulär lokalisiert sich FLT3 hauptsächlich an der Plasmamembran, mit Nachweis auch im Lumen des endoplasmatischen Retikulums, was mit seiner Biosynthese und dem Membrantransport übereinstimmt.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Glykosylierung, Phosphorylierung und Ubiquitin-Konjugation, die seine Aktivität, Stabilität und Signaloutput regulieren; Mutationen, die eine konstitutive Aktivierung verursachen, sind mit der akuten myeloischen Leukämie (AML) verbunden.
• Die Gewebeexpression ist im Knochenmark prominent, insbesondere in hämatopoetischen Stammzellen, myeloischen Vorläuferzellen und Granulozyten/Makrophagen-Vorläuferzellen; sie wird auch in Leber, Thymus, Milz, Lymphknoten und in geringerem Maße in Niere und Bauchspeicheldrüse nachgewiesen, mit hoher Expression bei T-Zell-Leukämie.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die N-terminale extrazelluläre Domäne (Aminosäuren 27–163), was darauf hindeutet, dass dieser monoklonale Antikörper das native extrazelluläre Epitop erkennen kann und ihn potenziell für die Durchflusszytometrie (FC) zum Nachweis von Zelloberflächen-FLT3 geeignet macht.
• Für ELISA-Anwendungen wird empfohlen, diesen Antikörper mit einem validierten Detektionsantikörper zu paaren, um einen empfindlichen Sandwich-ELISA einzurichten; optimale Arbeitskonzentrationen sollten für jedes Assaysystem experimentell bestimmt werden.
• Angesichts der Glykosylierung und potenziellen Dimerisierung von FLT3 kann denaturierendes Western Blotting eine sorgfältige Optimierung erfordern; Molekulargewichtsvarianten (108 und 113 kDa) spiegeln unterschiedliche Glykosylierungen oder Vorläuferformen wider.
• Der Antikörper ist spezifisch für humanes FLT3; Kreuzreaktivitäten mit anderen Spezies oder anderen Rezeptor-Tyrosinkinasen sollten unabhängig in der relevanten Probenmatrix verifiziert werden.

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