Anti-ERK2 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC IHC-P, IF/ICC, ELISA - P28482

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: ERK2-Funktion und -Lokalisierung

• ERK2 (MAPK1) ist eine Serin/Threonin-Kinase und eine wesentliche Komponente der MAPK/ERK-Signalkaskade, die zusammen mit ERK1 (MAPK3) diverse zelluläre Prozesse wie Wachstum, Adhäsion, Überleben und Differenzierung durch Phosphorylierung von über 160 Substraten reguliert. Verwandte Referenzen: PMID:35831023
• Die Kinase phosphoryliert eine Vielzahl von zytoplasmatischen, nukleären und organellen-spezifischen Zielen – wie Transkriptionsfaktoren (ATF2, ELK1, FOS), Zytoskelettproteine (MAP2, CTTN), Apoptoseregulatoren (BAD, MCL1) und Translationskontrollen (EIF4EBP1) – und steuert so die Genexpression, die Zytoskelettdynamik und die Apoptose.
• Unter hypoxischen Bedingungen phosphoryliert ERK2 PGK1 an den Mitochondrien, um die Bildung Acetyl-Coenzym A aus Pyruvat zu unterdrücken (PubMed:26942675). Verwandte Referenzen: PMID:26942675
• ERK2 fungiert auch als transkriptioneller Repressor, indem er an [GC]AAA[GC]-Konsensussequenzen bindet, um Interferon-gamma-induzierte Gene wie CCL5, IRF7 und OAS1 unabhängig von seiner Kinaseaktivität herunterzuregulieren.
• Die subzelluläre Lokalisierung ist kontextabhängig: ERK2 findet sich im Zytoplasma, assoziiert mit dem Zytoskelett und der Spindel, im Kern, an den Zentrosomen, Membranhöhlen (Caveolae) und fokalen Adhäsionen, was seine vielfältigen Signalrollen widerspiegelt.
• Wichtige posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung (Aktivierungsschleife TEY-Motiv), Acetylierung und Ubiquitinierung, mit Auswirkungen auf die Signaldauer und den zellulären Ort. Sie ist unter den Stichworten klassifiziert: Kinase, Serin/Threonin-Proteinkinase, Phosphoprotein, Acetylierung, Ubiquitin-Konjugation und andere.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht 41 kDa; erwägen Sie die Verwendung von Ganzzell-Lysaten aus HeLa-, HEK293- oder Jurkat-Zellen als positive Kontrollen, da ERK2 ubiquitär exprimiert wird.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) sollten Sie eine Reihe von Antigen-Retrieval-Methoden und Antikörperverdünnungen testen, da die Lokalisierung von ERK2 sowohl nukleär als auch zytoplasmatisch ist; geeignete normale und Tumorgewebsschnitte sollten validiert werden.
• Für die Immunfluoreszenz (IF/ICC) erhalten optimale Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen sowohl nukleäre als auch zytoskelettale ERK2-Signale; erwägen Sie eine Co-Färbung mit kompartimentspezifischen Markern.
• Die ELISA-Anwendung kann für die quantitative Detektion angepasst werden; kombinieren Sie sie mit einem ERK2-Capture-Antikörper und validieren Sie sie in rekombinanten Protein- und nativen Probenmatrizes.
• Das Immunogen liegt innerhalb der Reste 200–300, einem Bereich, der sich vom regulatorischen TEY-Motiv unterscheidet; dieser Antikörper kann sowohl phosphoryliertes als auch unphosphoryliertes ERK2 erkennen – validieren Sie bei Bedarf das phosphorylierungsabhängige Verhalten.
• Da es sich um einen polyklonalen Antikörper handelt, sollte die Chargen-zu-Chargen-Konsistenz in jeder Anwendung überprüft werden; die KO-Validierung (falls verfügbar) unterstützt die Zielspezifität.

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