Anti-EPS8-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q12929

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: EPS8-Funktion und -Lokalisierung

• EPS8 (Epidermal Growth Factor Receptor Kinase Substrate 8) ist ein Signaladapterprotein, das die Dynamik des Aktin-Zytoskeletts reguliert und Prozesse wie die Zellmigration und die Funktion von dendritischen Zellen steuert. Es wurde ursprünglich als Substrat für die EGF-Rezeptorkinase identifiziert.
• Das Protein fungiert als Teil eines trimeren Komplexes mit SOS1 und ABI1, um Signale von Ras zu Rac zu übertragen, indem es Rac-spezifische GEF-Aktivität aktiviert und somit die Wachstumsfaktorsignalgebung mit der Aktin-Umgestaltung verknüpft.
• EPS8 zeigt eine duale aktinmodulierende Aktivität: Barbed-End-Capping (Kappenbildung), wenn es an ABI1 gebunden ist (Hemmung der Motilität), und Aktin-Bündelung, wenn es mit BAIAP2 assoziiert ist, um Filopodienverlängerungen und Membranausstülpungen zu fördern.
• In Neuronen reguliert EPS8 die Bildung axonaler Filopodien durch Aktin-Capping negativ; jedoch hemmt die BDNF-induzierte Phosphorylierung diese Capping-Aktivität und ermöglicht das Filopodienwachstum.
• An den Spitzen der Stereozilien in Haarzellen bildet EPS8 einen Komplex mit WHRN und MYO15A, der für die Verlängerung des Aktinkerns essentiell ist, und Mutationen in EPS8 sind mit nicht-syndromischer Taubheit (DFNB102) assoziiert.
• Subzellulär lokalisiert es sich an den Zellcortex, Ruffles (Membranfalten), Wachstumskegel, Stereozilien und Synaptosomen, was seinen Rollen bei dynamischen, aktingetriebenen Membranausstülpungen entspricht.
• Das Protein enthält eine SH3-Domäne und unterliegt Phosphorylierung und Ubiquitinierung; der ubiquitinvermittelte Abbau ist während der G2-Phase für die mit dem Zellzyklusfortschritt verbundenen Formveränderungen der Zelle erforderlich.
• Weit verbreitet exprimiert in Geweben einschließlich Gehirn, Herz, Lunge, Leber, Niere und Bauchspeicheldrüse sowie in vielen epithelialen und fibroblastischen Zelllinien.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der N-terminalen Region (aa 1-200) von humanem EPS8, die einen Teil der SH3-Domäne und die N-terminale Region umfasst. Diese Region ist zwischen Mensch, Maus und Ratte relativ konserviert, was die Kreuzreaktivität erklärt. Berücksichtigen Sie einen Sequenzabgleich, wenn Sie mit anderen Spezies arbeiten.
• Für Western Blot beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht ~92 kDa (basierend auf UniProt: 91,9 kDa). Bänder können in der Nähe dieser Größe beobachtet werden; Phosphorylierung oder andere Modifikationen können jedoch zu leichten Verschiebungen führen. Validieren Sie mit geeigneten positiven und negativen Kontrollen.
• In ELISA-Anwendungen verwenden Sie gut charakterisiertes rekombinantes EPS8-Protein oder Zelllysate aus Linien mit bekannter Expression. Da EPS8 weit verbreitet exprimiert wird, wählen Sie ein System mit mittleren bis hohen Expressionsniveaus.
• Da es sich um einen polyklonalen Antikörper handelt, kann die Chargen-zu-Chargen-Konsistenz variieren; Erwägen Sie Pilotexperimente beim Wechsel der Chargen, insbesondere für quantitative Assays.

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