Polyklonaler Anti-EPHA3/EPHA4/EPHA5-Antikörper für IHC-P, IF/ICC, ELISA – P29320 / P54764 / P54756

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von EPHA3/EPHA4/EPHA5

• EPHA3 (Ephrin-Typ-A-Rezeptor 3) ist eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die zur Unterfamilie der Ephrin-Rezeptoren gehört. Es ist auch als EK4, HEK, TYRO4 und ETK1 bekannt. Der Antikörper erkennt EPHA3 sowie die eng verwandten EPHA4- und EPHA5-Rezeptoren aufgrund konservierter Epitope in der C-terminalen Region.
• Nach der Bindung an Ephrin-A-Liganden auf benachbarten Zellen vermittelt EPHA3 eine bidirektionale Signalübertragung: Vorwärtssignale über seine intrazelluläre Kinasedomäne und Rückwärtssignale über den Ephrin-Liganden. Diese kontaktabhängige Kommunikation reguliert die Zell-Zell-Adhäsion, die Dynamik des Zytoskeletts und die Zellmigration. Verwandte Referenzen: PMID:11870224
• EPHA3 bindet bevorzugt an Ephrin-A5 (EFNA5), interagiert jedoch auch mit Ephrin-A1 (EFNA1). Die Aktivierung durch EFNA1 hemmt den epithelial-mesenchymalen Übergang in Herzzellen und trägt zur normalen Herzentwicklung bei. Verwandte Referenzen: PMID:12794130
• Der Rezeptor befindet sich in der Zellmembran und kann auch in sezernierten Formen vorkommen. Er ist ein einteiliger Typ-I-Membranprotein mit einer extrazellulären Ligandenbindungsdomäne, einer zysteinreichen Region, zwei Fibronektin-Typ-III-Wiederholungen, einem Transmembransegment und einer intrazellulären Tyrosinkinasedomäne.
• EPHA3 wird weit verbreitet exprimiert, wobei die höchsten Konzentrationen in der Plazenta beobachtet werden. Es spielt eine Rolle bei der retinotektalen Kartierung von Neuronen und der Trennung motorischer und sensorischer Axone während der Entwicklung neuromuskulärer Schaltkreise.
• Zu den wichtigsten strukturellen Merkmalen gehören ATP-Bindungs- und Transferaseaktivitäten, N-Glykosylierung und Phosphorylierung. Das Protein voller Länge hat ein berechnetes Molekulargewicht von etwa 110 kDa.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das zur Herstellung dieses Antikörpers verwendete Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das aus einer konservierten Region (Aminosäuren 700–800) stammt, die von menschlichem EPHA3, EPHA4 und EPHA5 gemeinsam genutzt wird. Dieses Design trägt wahrscheinlich zur nachgewiesenen Kreuzreaktivität mit Orthologen von Maus und Ratte bei.
• Für IHC-P sollte eine Optimierung der Antigen-Retrieval-Methode und der Antikörperverdünnung in Betracht gezogen werden. Die Validierung sollte an Gewebeproben durchgeführt werden, von denen bekannt ist, dass sie Mitglieder der EPHA-Familie exprimieren, beispielsweise Plazenta- oder Nervengewebe.
• Für IF/ICC können Permeabilisierungsprotokolle erforderlich sein, um intrazelluläre Epitope nachzuweisen. Geeignete Kontrollen sollten eingeschlossen werden, beispielsweise Zellen mit bestätigter EPHA-Expression.
• Im ELISA kann der Antikörper zum Nachweis rekombinanter oder nativer EPHA3/4/5-Proteine verwendet werden. Es ist sicherzustellen, dass das Beschichtungsantigen und das Nachweissystem mit einem polyklonalen Kaninchenantikörper kompatibel sind.

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