Anti-eNOS monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P29474

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: eNOS-Funktion und Lokalisierung

• eNOS (NOS3) erzeugt Stickstoffmonoxid (NO), ein gasförmiges Signalmolekül, das über cGMP vaskuläre glatte Muskulatur entspannt. Verwandte Referenzen: PMID:1378832
• NO von eNOS treibt auch VEGF-induzierte koronare Angiogenese an und erleichtert die plättchenvermittelte Gerinnung.
• Das Gen NOS3 produziert zwei Isoformen; Isoform 2 fehlt die katalytische Aktivität und wirkt als dominant-negativer Regulator durch Heterodimerisierung mit Isoform 1.
• eNOS lokalisiert hauptsächlich in Caveolae an der Plasmamembran, assoziiert aber auch mit dem Golgi-Apparat, dem Zytoskelett und dem Zytoplasma.
• Es wird in Thrombozyten, Plazenta, Leber und Niere exprimiert.
• eNOS ist ein Multidomänen-Enzym, das für seine Aktivität FAD, FMN, NADPH, Häm, Kalzium und Calmodulin benötigt und durch Myristoylierung, Palmitoylierung und Phosphorylierung reguliert wird.
• Gehört zur Familie der Stickstoffmonoxid-Synthasen; sein Molekulargewicht beträgt etwa 133 kDa.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst das C-terminale Segment (aa 1035–1110) von menschlichem eNOS, was die aktive Vollform-Isoform von verkürzten Varianten unterscheiden kann; Spezifität mit isoform-spezifischen Assays bestätigen.
• Für Western Blotting wird eine Bande bei ~133 kDa erwartet; endotheliale Lysate (z.B. HUVEC) als positive Kontrollen einbeziehen und geeignete reduzierende Bedingungen verwenden.
• Bei der immunohistochemischen (Paraffin-)Analyse werden Antigen-Retrieval (z.B. Citratpuffer, pH 6.0) und Gewebe mit hoher endogener eNOS-Expression (z.B. Plazenta, Niere) als erste Validierungsschritte empfohlen.
• Die ELISA-Leistung hängt vom Beschichtungsformat und dem Nachweissystem ab; Kreuzreaktivität mit Ratten- und Mäuse-eNOS ermöglicht Flexibilität bei artenübereinstimmenden Assays.

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