Anti-Endothelin 1 (ET1, PPET1), polyklonaler Kaninchenantikörper für WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P05305

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Endothelin 1

• Endothelin-1 (ET-1), kodiert durch das EDN1-Gen, gehört zur Endothelin-Familie und wird zunächst als Präproendothelin-1 (PPET1) synthetisiert, einem aus 212 Aminosäuren bestehenden Vorläufer, der durch Spaltung an gepaarten basischen Resten und die Bildung von Disulfidbrücken in aktive Peptide umgewandelt wird.
• Es wirkt als endothelabgeleitetes vasokonstriktorisches Peptid und wahrscheinlich als Ligand für die G-Protein-gekoppelten Rezeptoren EDNRA und EDNRB, wodurch in glomerulären Mesangiumzellen die Signalwege von PTK2B, BCAR1, BCAR3 sowie der GTPasen RAP1 und RHOA ausgelöst werden.
  Zugehörige Referenzen: PMID:19086031
• Darüber hinaus bindet ET-1 an den DEAR/FBXW7-AS1-Rezeptor und erweitert damit sein funktionelles Spektrum über die klassischen Endothelin-Rezeptoren hinaus.
  Zugehörige Referenzen: PMID:17446437
• Über die ROCK-Signalübertragung fördert ET-1 den Umbau der mesenterialen Arterienwand, erleichtert die nukleäre Translokation von NFATC3 und die Transkription von Markern der glatten Muskelhypertrophie wie ACTA2.
• Das Protein wird sezerniert und zeigt eine gewebespezifische Expression in der Lunge, in den Gefäßen der Stammzotten der Plazenta und in kultivierten vaskulären glatten Muskelzellen der Plazenta, was seine Rolle in der respiratorischen und reproduktiven Gefäßphysiologie unterstreicht.
• Zu den wesentlichen Merkmalen der posttranslationalen Prozessierung gehören die Spaltung an einem Paar basischer Reste und die Bildung von Disulfidbrücken, wie annotiert; die Schlüsselwörter weisen außerdem auf seinen Status als Vasokonstriktor und Bestandteil des Referenzproteoms hin.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 18-212 des menschlichen Endothelin-1-Präproproteins (NP_001946.3) und deckt den Großteil der Vorläufersequenz ab. Dieses Design kann sowohl das vollständige Präproprotein als auch seine proteolytisch verarbeiteten Formen erkennen; berücksichtigen Sie die Validierung des Nachweises spezifischer Isoformen in Ihrem Probensystem.
• Beim Western Blot (WB) kann eine Bande bei etwa 24 kDa beobachtet werden, die dem Präproprotein entspricht. Unter reduzierenden Bedingungen können jedoch zusätzliche Banden verarbeiteter Peptide auftreten, beispielsweise Big-Endothelin-1 bei etwa 4-5 kDa und reifes ET-1 bei etwa 2,5 kDa. Optimieren Sie daher den Gelanteil und die Transferbedingungen entsprechend.
• Bei Immunzytochemie (IF/ICC) und Immunhistochemie (IHC-P) sollten Sie auf eine geeignete Fixierung und Permeabilisierung achten, um eine optimale Zugänglichkeit der Epitope zu gewährleisten. Fügen Sie bei Bedarf Peptid-Blockierungskontrollen ein, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für ELISA-Anwendungen sollten Sie die Antikörperpaarung und Verdünnung in Ihrem eigenen Matrixsystem testen, da die Leistung je nach Probentyp und Assayformat variieren kann.

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