Anti-eIF4E Kaninchen-Monoklonaler Antikörper [KD Validated] für WB, IF/ICC, IP, ELISA - P06730

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: eIF4E-Funktion und Lokalisierung

• Der eukaryotische Translationsinitiationsfaktor 4E (eIF4E), auch bekannt als eIF4E1, eIF-4F 25 kDa Untereinheit oder mRNA-Cap-bindendes Protein, wird durch das EIF4E-Gen (Gen-ID: 1977) kodiert. Er erfüllt Doppelfunktionen im Zytoplasma für die Translationsinitiierung und im Zellkern für den mRNA-Export (PubMed:11606200, PubMed:22578813, PubMed:22684010).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:11606200, PMID:22578813, PMID:22684010

• eIF4E erkennt spezifisch das 7-Methylguanosin(m7G)-Cap am 5'-Ende von mRNAs und bindet daran, ein kritischer Schritt, der die Ribosomenrekrutierung und das Entwinden von mRNA-Sekundärstrukturen erleichtert (PubMed:16271312, PubMed:22578813). Zusammen mit EIF4G1 ermöglicht es die TISU-Element-abhängige Translation und umgeht die Notwendigkeit des ribosomalen Scannings (PubMed:29987188).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:16271312, PMID:22578813, PMID:29987188

• Über die Initiierung hinaus reguliert eIF4E die zytoplasmatische mRNA-Stabilität und -Speicherung. In P-Bodies beteiligt es sich an einem Komplex, der translationsreprimierte mRNAs sequestriert und so deren Abbau verhindert (PubMed:24335285).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:24335285

• eIF4E erleichtert den Kernexport einer Untergruppe von mRNAs, einschließlich NOS2/iNOS und MDM2, über Wechselwirkungen mit dem 4ESE-Element und dem LRPPRC–XPO1-Exportweg und beeinflusst so Prozesse wie Apoptose und Zellzyklusprogression (PubMed:23471078, PubMed:22684010).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:23471078, PMID:22684010

• Subzellulär lokalisiert eIF4E im Zytoplasma, in P-Bodies, Stress Granules sowie im Zellkern (einschließlich Kern-Speckles und Kernkörperchen), was seine vielseitigen Rollen widerspiegelt.

• eIF4E unterliegt Phosphorylierung (z.B. an Ser209), die seine Cap-Bindungsaffinität und Translationsaktivität moduliert. Auch Acetylierung wurde berichtet, und das Protein unterliegt alternativem Spleißen, was zu Isoformen mit Molekularmassen um 25–29 kDa führt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen, ein synthetisches Peptid, das die Reste 1–100 von humanem eIF4E (NP_001959.1) umfasst, zielt auf die konservierte N‑terminale Region. Basierend auf der Sequenzhomologie wird eine Kreuzreaktivität mit Maus-, Ratten- und Affen-Orthologen erwartet, was vom Lieferanten bestätigt wurde.
• Beim Western Blot (WB) sind Banden entsprechend den 25 kDa-, 27 kDa- und 29 kDa-Isoformen zu erwarten; Ladekontrollen und Blockierbedingungen sollten für den Probentyp optimiert werden.
• Für die Immunfluoreszenz (IF/ICC) zeigt eIF4E typischerweise ein diffuses zytoplasmatisches Signal mit punktförmiger Kernfärbung; Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle müssen je nach Zelllinie möglicherweise angepasst werden.
• Dieser Antikörper ist für Immunpräzipitation (IP) und ELISA validiert; für quantitative Assays sollten geeignete positive und negative Kontrollen eingeschlossen werden.
• Da eIF4E an mehreren Komplexen beteiligt ist, kann native IP Interaktionspartner mitpräzipitieren; denaturierende Lysebedingungen können verwendet werden, um Gesamt-eIF4E zu isolieren.

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