Anti-eIF4A-Kaninchen-Polyklonalantikörper für WB, IF/ICC, ELISA – P60842 / Q14240 / P38919

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von eIF4A

• eIF4A-1 (P60842), auch als DDX2A bezeichnet, ist eine ATP-abhängige RNA-Helikase und eine zentrale Untereinheit des eIF4F-Translationsinitiationskomplexes.
• Als Bestandteil von eIF4F ist eIF4A-1 an der cap-abhängigen Translationsinitiation beteiligt, indem es RNA-Sekundärstrukturen in der 5'-UTR von mRNAs entwindet und dadurch die Ribosomenbindung sowie das Scannen nach dem Startcodon ermöglicht.
  Verwandte Referenz: PMID:20156963
• Diese Helikaseaktivität ist für eine effiziente Proteinsynthese essenziell und trägt zur Zellproliferation und zum Zellwachstum bei.
• Die eIF4A-Familie besteht aus drei hochhomologen Mitgliedern: eIF4A-1 (P60842), eIF4A-2 (Q14240) und eIF4A-3 (P38919), die alle konservierte DEAD-Box-Helikasen-Domänen aufweisen.
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst das Zytoplasma, die perinukleäre Region, die Zellmembran und Stressgranula, in die das Protein unter zellulärem Stress rekrutiert wird.
• Posttranslationale Modifikationen wie Acetylierung, Phosphorylierung und Ubiquitinierung regulieren seine Aktivität und Stabilität.
• eIF4A-1 ist außerdem an Wirt-Virus-Interaktionen beteiligt und spielt eine Rolle bei der Replikation bestimmter Viren.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die N-terminale Region (AS 1–100) des menschlichen eIF4A-1 abdeckt. Der resultierende polyklonale Antikörper kann aufgrund der hohen Sequenzkonservierung mehrere Mitglieder der eIF4A-Familie erkennen. Es sollte daher erwogen werden, die Spezifität für die gewünschte Isoform im relevanten Zell- oder Gewebelysat zu überprüfen.
• Beim Western Blot ist für eIF4A-1 eine dominante Bande bei etwa 46 kDa zu erwarten. Zusätzliche Banden können eIF4A-2 (ca. 46 kDa) und eIF4A-3 (ca. 48 kDa) entsprechen. Verwenden Sie geeignete positive und negative Kontrollen.
• Bei der Immunfluoreszenz/ICC kann eine Färbung im Zytoplasma und im Zellkern beobachtet werden, mit einer möglichen Anreicherung in der perinukleären Region oder in Stressgranula unter Stressbedingungen. Für Lokalisationsstudien kann eine Vorbehandlung der Zellen zur Induktion der Stressgranulabildung, beispielsweise mit Arsenit, eingesetzt werden.
• Für ELISA eignet sich der Antikörper als Fänger- oder Detektionsreagenz in Sandwich-Formaten. Die Kreuzreaktivität mit anderen Proteinen der eIF4A-Familie sollte empirisch untersucht werden.
• Da es sich um einen polyklonalen Antikörper handelt, sollte eine konsistente Leistung zwischen verschiedenen Chargen validiert werden. Für quantitative Assays sollte der Einsatz interner Referenzstandards erwogen werden.

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