Anti-EIF3J Polyclonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA – O75822

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von EIF3J

• Proteinidentität: EIF3J (Untereinheit J des eukaryotischen Translationsinitiationsfaktors 3), auch bekannt als EIF3S1, eIF3-p35, eIF3-alpha, wird vom EIF3J-Gen (Gen-ID 8669) kodiert. Es handelt sich um eine Kernuntereinheit des etwa 800 kDa großen eIF3-Komplexes.
• Kernfunktion bei der Translationsinitiation: EIF3J ist eine Komponente des eIF-3-Komplexes, der für die eukaryotische Proteinsynthese essenziell ist. eIF-3 bindet an die 40S-Ribosomenuntereinheit und erleichtert die Rekrutierung von eIF-1, eIF-1A, eIF-2:GTP:Methionyl-tRNAi und eIF-5 zur Bildung des 43S-Präinitiationskomplexes (43S PIC). Außerdem stimuliert es die Rekrutierung von mRNA an den 43S PIC und das Scannen zur Erkennung des AUG-Startcodons. Verwandte Referenzen: PMID:25849773, PMID:27462815
• Ribosomen-Recycling: Der eIF-3-Komplex ist für die Disassemblierung und Wiederverwendung von post-terminations Ribosomenkomplexen erforderlich und verhindert eine vorzeitige Verbindung der 40S–60S-Untereinheiten vor der Initiation.
• Regulatorische Rolle bei der Translation: Der eIF-3-Komplex zielt selektiv auf eine Untergruppe von mRNAs ab, die an Zellproliferation, Differenzierung und Apoptose beteiligt sind, und kontrolliert deren Translation, wobei er unterschiedliche Bindungsmodi an RNA-Stamm-Schleifen nutzt, um entweder transkriptionelle Aktivierung oder Repression auszuüben. Verwandte Referenzen: PMID:25849773
• Subzelluläre Lokalisation: Überwiegend zytoplasmatisch, was mit seiner Rolle bei der Translationsinitiation an zytoplasmatischen Ribosomen übereinstimmt.
• Posttranslationale Modifikationen: EIF3J kann acetyliert, phosphoryliert, durch Isopeptidbindung (ubiquitin-ähnlich) modifiziert und ubiquitiniert werden, wie Proteomikstudien belegen. Diese Modifikationen können die Assemblierung und Aktivität des Komplexes regulieren.
• Alternatives Spleißen: Für EIF3J existieren mehrere Transkriptvarianten, die potenziell Isoformen mit unterschiedlichen Funktionen oder Expressionsmustern ergeben.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Immunogen-Design: Der Antikörper wurde gegen ein rekombinantes Protein gerichtet, das die Aminosäuren 1–258 von menschlichem EIF3J abdeckt. Dieser N-terminale Bereich ist wahrscheinlich über Arten hinweg konserviert, was die beobachtete Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte unterstützt. Er sollte vollständiges endogenes EIF3J in den relevanten Arten nachweisen können.
• Western Blot (WB): Verwenden Sie Ganzzelllysate von Proben aus Mensch, Maus oder Ratte. Das vorausgesagte Molekulargewicht beträgt etwa 29 kDa. Validieren Sie die Spezifität durch die Einbeziehung von Knockdown- oder Überexpressionskontrollen und optimieren Sie die Beladungsmenge, um eine Sättigung zu vermeiden.
• Immunfluoreszenz/ICC: EIF3J lokalisiert im Zytoplasma; permeabilisieren Sie Zellen mit einem milden Detergenz (z. B. 0,1 % Triton X-100) und blockieren Sie mit Serum passend zur Wirtsart. Testen Sie Antikörperverdünnungen beginnend bei 1:50–1:200.
• ELISA: Bestätigen Sie die Bindung mit rekombinantem EIF3J-Protein oder Peptid, das der Immunogensequenz entspricht. Optimieren Sie die Beschichtungskonzentration (typischerweise 1–10 µg/mL) und die Detektionsbedingungen.
• Probenhandhabung: Versand erfolgt mit Eisbeuteln; nach Ankunft aliquotieren und bei -20 °C bis -80 °C lagern. Vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen.

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