Anti-eIF2C3 monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - Q9H9G7

Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von eIF2C3/Argonaute-3

• eIF2C3, auch bekannt als Argonaute-3 (Ago3) oder Eukaryotischer Translationsinitiationsfaktor 2C 3, ist eine Kernkomponente des RNA-induzierten Silencing-Komplexes (RISC), der an der post-transkriptionalen Gen-Stummschaltung beteiligt ist.
• Es bindet an kurze RNAs wie miRNAs und unterdrückt die Translation komplementärer mRNAs. In Stammzellen stabilisiert es vermutlich siRNAs, die von Alu-Repeats abgeleitet sind, und erleichtert den Abbau einer Untergruppe kodierender mRNAs durch Rekrutierung des mRNA-Decapping-Komplexes via EDC4.
• eIF2C3 besitzt eine RNA-Slicer-Aktivität (endonukleolytisch), ist jedoch hochselektiv und spaltet nur RNAs mit spezifischen 5'- und 3'-flankierenden Sequenzen relativ zur Guide-Target-Komplementaritätsregion (PubMed:29040713). Zugehörige Referenzen: PMID:29040713
• Das Protein lokalisiert im Zytoplasma und konzentriert sich in P-Bodies, zytoplasmatischen Granula, die an der Speicherung und dem Abbau von mRNA beteiligt sind.
• eIF2C3 unterliegt posttranslationalen Modifikationen wie Acetylierung, Phosphorylierung und Ubiquitin-ähnlicher Konjugation, die seine Stabilität und Aktivität regulieren können.
• Das AGO3-Gen wird alternativ gespleißt, wodurch mehrere Isoformen entstehen, die unterschiedliche Funktionen oder Expressionsmuster aufweisen können.
• Es wird unter verschiedenen funktionellen Schlüsselwörtern klassifiziert: Es ist ein RNA-bindendes Protein, eine Endonuklease, Hydrolase, Metall-bindendes Protein und Ribonukleoprotein, was seine katalytischen und strukturellen Rollen beim RNA-Silencing unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der C-terminalen Region (Aminosäuren 721-860) des humanen eIF2C3, die Teil der PIWI-Domäne ist; diese Domäne ist entscheidend für die Endonuklease-Aktivität und die Bindung der Guide-RNA. Forscher sollten sicherstellen, dass das Epitop unter ihren experimentellen Bedingungen zugänglich ist.
• Für Western Blotting (WB) ist eine Bande bei etwa 97 kDa zu erwarten. Optimieren Sie die Probenvorbereitung mit geeigneten Lyse- und Reduktionsbedingungen und schließen Sie sowohl positive (z. B. HeLa) als auch negative (z. B. Knockout) Kontrollen ein, um die Spezifität zu überprüfen.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) sollten Standardmethoden zur Antigen-Demaskierung (z. B. Citratpuffer, pH 6,0) in Betracht gezogen und die Färbung durch Vergleich mit bekannten eIF2C3-Expressionsmustern oder unter Verwendung von siRNA-behandelten Gewebeschnitten validiert werden.
• Stellen Sie bei ELISA-Anwendungen eine korrekte Beschichtung des rekombinanten Proteins oder Peptids sicher und testen Sie verschiedene Antikörperkonzentrationen, um die optimale Empfindlichkeit und Spezifität zu bestimmen.

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