Anti-EGFR (Phospho Y1068) Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB und ELISA - P00533

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: EGFR-Funktion und -Lokalisierung

• EGFR ist ein Rezeptor-Tyrosinkinase, die an Liganden der EGF-Familie bindet, was die Rezeptordimerisierung und Autophosphorylierung an wichtigen zytoplasmatischen Resten, einschließlich Y1068, auslöst, um die Downstream-Signalisierung zu aktivieren (PubMed:10805725, PubMed:27153536, PubMed:2790960). Verwandte Referenzen: PMID:10805725, PMID:27153536, PMID:2790960
• Der phosphorylierte Rezeptor rekrutiert Adaptorproteine wie GRB2, was zur Aktivierung von mindestens vier wichtigen Signalkaskaden führt: RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCγ-PKC und STAT-Module (PubMed:27153536). Verwandte Referenzen: PMID:27153536
• EGFR phosphoryliert direkt andere Proteine, einschließlich RGS16 und MUC1, und verknüpft so die EGF-Signalisierung mit der GPCR-Signalisierung und Zelladhäsionswegen (PubMed:11602604, PubMed:11483589). Darüber hinaus kann es die NF-Kappa-B-Signalkaskade aktivieren (PubMed:11116146). Verwandte Referenzen: PMID:11602604, PMID:11483589, PMID:11116146
• Die Wechselwirkung mit CCDC88A/GIV hält EGFR an der Zellmembran zurück und fördert die Zellmigration (PubMed:20462955). Verwandte Referenzen: PMID:20462955
• Subzellulär ist EGFR in der Zellmembran, dem endoplasmatischen Retikulum, dem Golgi-Apparat, dem Zellkern, den Endosomen lokalisiert und kann sezerniert werden. Diese dynamische Verteilung unterstützt seine vielseitigen Signalrollen.
• Ubiquitär exprimiert, wobei Isoform 2 auch in Eierstockkrebsen nachgewiesen wurde. EGFR fungiert auch als Wirtsrezeptor für den Eintritt des Hepatitis-C-Virus (HCV) in Hepatozyten.
• Schlüssel-posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung (insbesondere an Y1068 nach Ligandenbindung), Glykosylierung, Ubiquitinierung und Palmitoylierung, die für seine Kinaseaktivität und Signaldauer unerlässlich sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das dem Y1068-Bereich entspricht; für WB sollten Sie sicherstellen, dass Phosphatase-Inhibitoren in den Lysepuffern enthalten sind, um die Phosphorylierung zu erhalten.
• Für ELISA kann die Beschichtung mit dem phosphorylierten Peptidantigen helfen, die Antikörperspezifität zu bewerten; ein nicht-phosphoryliertes Peptid kann als Negativkontrolle dienen.
• Dieser Antikörper hat Kreuzreaktivität mit menschlichem und murinem EGFR gezeigt, sodass er auf Studien in beiden Spezies angewendet werden kann; jedoch wird eine Validierung im Zielsamplingsystem empfohlen.
• Erwägen Sie die Verwendung einer Ladungskontrolle, die nicht vom Phosphorylierungsstatus beeinflusst wird, um WB-Signale zu normalisieren.
• Angesichts des Molekulargewichts von 134 kDa, passen Sie den Gelanteil und die Transferbedingungen entsprechend an.

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