Anti-EARS2-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, ELISA – Q5JPH6

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von EARS2

• EARS2 kodiert die mitochondriale nichtdiskriminierende Glutamyl-tRNA-Synthetase (mtGluRS), die sowohl tRNA(Glu) als auch tRNA(Gln) einzigartig mit Glutamat aminoacyliert – ein entscheidender Schritt für die mitochondriale Proteintranslation. Zugehörige Referenzen: PMID:19805282
• Das Enzym arbeitet über einen zweistufigen, ATP-abhängigen Mechanismus: Glutamat wird zunächst zu Glu-AMP aktiviert und anschließend auf das 3'-Ende der entsprechenden tRNAs übertragen. Zugehörige Referenzen: PMID:19805282
• EARS2 gehört zur Familie der Aminoacyl-tRNA-Synthetasen der Klasse I und enthält konservierte Domänen für ATP-Bindung, RNA-Bindung und Ligaseaktivität.
• Das Protein ist in der mitochondrialen Matrix lokalisiert und wird durch ein N-terminales Transitpeptid dorthin geleitet.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Transkriptvarianten, die möglicherweise die enzymatische Funktion oder die mitochondriale Zielsteuerung regulieren.
• Eine posttranslationale Acetylierung wurde identifiziert und kann die Aktivität oder Stabilität beeinflussen.
• Mutationen in EARS2 werden mit primären mitochondrialen Erkrankungen in Verbindung gebracht, einschließlich des kombinierten Defekts der oxidativen Phosphorylierung 12 (COXPD12).

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 42–220 und deckt eine konservierte Region ab, die unter nativen und denaturierenden Bedingungen wahrscheinlich exponiert ist, wodurch der Antikörper für WB und ELISA geeignet ist.
• Für den Western Blot sollten 20–30 µg eines mitochondrial angereicherten Lysats oder eines Gesamtzelllysats geladen werden; erwarten Sie eine Bande bei etwa 59 kDa. Validieren Sie dies in Ihrem Probensystem, da posttranslationale Modifikationen geringfügige Verschiebungen verursachen können.
• Der Antikörper zeigt eine Kreuzreaktivität mit murinem EARS2. Bei der Verwendung von Mausgewebe oder -zellen sollte die Spezifität mit geeigneten Kontrollen überprüft werden, beispielsweise mit Knockdown- oder Knockout-Modellen.
• Für den ELISA sollten das Beschichtungsantigen (rekombinantes Protein oder Peptid) und die Antikörperverdünnung optimiert werden; ein direkter ELISA kann zur Bestimmung des Antikörpertiters und der Bindungsaffinität eingesetzt werden.
• Aliquots bei -20 °C oder -80 °C lagern. Wiederholte Einfrier- und Auftauzyklen vermeiden, um die Aktivität zu erhalten.

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