Anti-Dystonin (DST) Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q03001

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Dystonin-Funktion und -Lokalisierung

• Dystonin (DST), auch bekannt als bullöses Pemphigoid-Antigen 1 (BPAG1) oder 230/240 kDa bullöses Pemphigoid-Antigen, ist ein großes zytoskelettales Verbindungsprotein, das zur Plakin-Familie gehört. Durch die Verwendung alternativer Promotoren und Spleißen werden multiple Isoformen erzeugt, wobei Isoform 1 in Myoblasten, Isoform 3 in der Haut und Isoform 6 im Gehirn exprimiert wird.
• Dystonin integriert die Netzwerke aus Intermediärfilamenten, Aktin und Mikrotubuli des Zytoskeletts. Es verankert keratinhaltige Intermediärfilamente an Hemidesmosomen in epithelialen Zellen und spielt eine strukturelle Rolle bei der Zusammenstellung von Hemidesmosomen sowie der Regulation der Polarität und Motilität von Keratinozyten über ITGB4-RAC1-Signalisierung.
• In neuronalen und Muskelzellen ist DST für die Verankerung von Intermediärfilamenten an das Aktin-Zytoskelett und für die Bündelung von Aktinfilamenten um den Zellkern erforderlich. Es reguliert auch die Organisation und Stabilität des Mikrotubuli-Netzwerks in sensorischen Neuronen, um den axonalen Transport zu unterstützen.
• Die subzelluläre Lokalisierung ist sehr vielfältig: Dystonin findet sich an Hemidesmosomen, im Zytoplasma, an Spannungsfasern, der Zellrinde, in Axonen, an sarkomeren Z-Linien und H-Zonen, der Kernhülle und der Membran des endoplasmatischen Retikulums, was seine vielseitigen Verankerungsfunktionen widerspiegelt.
• Zu den wichtigsten posttranslationalen Modifikationen und strukturellen Merkmalen gehören Kalziumbindung, Coiled-Coil-Bereiche, SH3-Domäne und eine CH-Domäne; es ist ein Phosphoprotein, ein palmitoyliertes Lipoprotein und enthält Isopeptidbindungen. Es verfügt außerdem über Transmembranbereiche und ist an der Ubiquitin-Konjugation beteiligt.
• Die gewebespezifische Expression unterstreicht seine Rolle in Muskel-, Haut- und Neuronengeweben: Es wird hoch in Skelettmuskeln und kultivierten Keratinozyten exprimiert, wobei unterschiedliche Isoformen zur gewebespezifischen Organisation des Zytoskeletts und mechanischen Integrität beitragen.
• Mutationen im DST-Gen sind mit Epidermolysis bullosa simplex und hereditärer sensorischer und autonomer Neuropathie Typ 6 verbunden, was seine kritische Rolle bei der Aufrechterhaltung der Gewebewiderstandsfähigkeit unterstreicht.
• Zusätzliche Funktionen umfassen die Vermittlung des Andockens des Dynein/Dynactin-Motorkomplexes an Vesikel-Cargos für den retrograden axonalen Transport durch Wechselwirkungen mit TMEM108 und DCTN1, wodurch das Zytoskelett mit dem intrazellulären Transport verknüpft wird.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein rekombinantes Fusionsprotein, das den N-terminalen 270 Aminosäuren von humanem DST (NP_001714.1) entspricht. Für den Western Blot sollten Sie beachten, dass das全长-Dystonin extrem groß ist (~861 kDa); stellen Sie daher geeignete Gelbedingungen ein (z. B. niedriger Acrylamidanteil) und verlängern Sie die Transferzeiten. Auch der Nachweis kleinerer Isoformen ist möglich.
• Für ELISA-Anwendungen validieren Sie die Beschichtungsbedingungen und die Antikörpertiterung unter Verwendung von rekombinantem Protein oder Zelllysaten relevanter Spezies (Mensch, Maus, Ratte). Aufgrund der polyklonalen Natur sollte die Chargen-zu-Chargen-Konsistenz bewertet werden, wenn es für quantitative Assays verwendet wird.
• Die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte ist angegeben; bestätigen Sie jedoch die endogene Expression in Zielgeweben oder Zelllinien, da Dystonin-Isoformen variieren. Die endogenen Spiegel können in einigen häufig verwendeten Zelllinien niedrig sein.

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