Anti-Dopamin-Beta-Hydroxylase Kaninchen-Monoklonalantikörper für WB und ELISA - P09172

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der Dopamin-Beta-Hydroxylase

• Proteinidentität: Dopamin-Beta-Hydroxylase (DBH), auch bekannt als Dopamin-Beta-Monooxygenase, wird beim Menschen vom DBH-Gen kodiert und gehört zur Familie der Kupfer-Typ-II-Ascorbat-abhängigen Monooxygenasen.
• Kernfunktion: DBH katalysiert die Hydroxylierung von Dopamin zu Noradrenalin (Norepinephrin), ein grundlegender Schritt im Katecholamin-Biosyntheseweg, der das Gleichgewicht der Neurotransmitter reguliert.
• Genfamilie: DBH ist ein Mitglied der Monooxygenase-Familie; es werden keine eng verwandten Paraloge im menschlichen Genom beschrieben, was ihre einzigartige Rolle bei der Katecholamin-Produktion unterstreicht.
• Subzelluläre Lokalisierung: DBH ist hauptsächlich im Lumen und in der Membran von sekretorischen Vesikeln, insbesondere Chromaffingranula, lokalisiert, kann aber nach Exozytose auch in den extrazellulären Raum sezerniert werden.
• Posttranslationale Modifikationen und Kofaktoren: Als Glykoprotein unterliegt DBH einer extensiven N-Glykosylierung, enthält essentielle Disulfidbrücken für die strukturelle Stabilität und benötigt Kupferionen sowie Vitamin C (Ascorbat) als Kofaktoren für ihre Oxidoreduktase-Aktivität.
• Molekulargewicht: Das berechnete Molekulargewicht des nicht glykosylierten Vorläufers beträgt ca. 69.065 Da, was mit der ~69 kDa-Bande übereinstimmt, die in der SDS-PAGE unter reduzierenden Bedingungen beobachtet wird.
• Krankheitsassoziationen: Genetische Variationen und Mutationen im DBH wurden mit orthostatischer Hypotonie und anderen Störungen in Verbindung gebracht, was ihre klinische Relevanz unterstreicht (angezeigt durch das Schlüsselwort „Disease variant“ in UniProtKB).
• Zusätzliche Hinweise: DBH wird auch als sekretiertes Protein und ein Referenz-Proteom-Eintrag identifiziert, wobei ihre 3D-Struktur bestimmt und direkte Proteinsequenzierungsdaten verfügbar sind, was ihre biochemische Charakterisierung untermauert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Western-Blot-Anwendung: Der Antikörper detektiert eine Bande um 69 kDa in menschlichen Proben; erwägen Sie die Verwendung reduzierender Bedingungen und die Validierung des Signals in Geweben oder Zelltypen, die bekanntermaßen DBH exprimieren, wie z. B. Nebennierenmark oder sympathische Neuronen.
• Immundesign: Das rekombinante Fragment, das die Aminosäuren 100–250 abdeckt, entspricht einer konservierten Region innerhalb der katalytischen Domäne. Der Antikörper kann sowohl die reife luminalen Form als auch jeden membranassoziierten Vorläufer erkennen, sofern dieser im Lysat vorhanden ist.
• ELISA-Überlegungen: Bei der Entwicklung von Sandwich-Immunoassays testen Sie die Paarungskompatibilität mit einem geeigneten Fang-Antikörper. Berücksichtigen Sie, dass DBH sezerniert wird; daher kann eine sorgfältige Auswahl des Probentyps (z. B. Plasma, konditioniertes Medium) und Vorinkubationsschritte die Detektion verbessern.
• Kreuzreaktivität: Während dokumentiert ist, dass der Antikörper mit menschlichem DBH reagiert, sollte eine potenzielle Kreuzreaktivität mit anderen Spezies oder DBH-Isoformen unabhängig überprüft werden, insbesondere wenn quantitative Anwendungen beabsichtigt sind.
• Probenvorbereitung: Aufgrund der dualen Lokalisierung von DBH in vesikulären Membranen und Lumina können Solubilisierungsstrategien (z. B. milde Detergenzien) oder eine subzelluläre Fraktionierung erforderlich sein, um ein optimales Signal in Festphasenassays zu erzielen.

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