Kaninchen-monoklonaler Anti-DNMT3B-Antikörper für WB, ChIP, ELISA – Q9UBC3

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von DNMT3B

• DNMT3B ist eine DNA-(Cytosin-5)-Methyltransferase, die die De-novo-DNA-Methylierung katalysiert und Methylierungsmuster etabliert, die für die embryonale Entwicklung und die Zelldifferenzierung entscheidend sind.
• DNMT3B methyliert bevorzugt nukleosomale DNA innerhalb der Kernregion und kann die DNA-Methylierung mit Histonmodifikationen koordinieren, um die Chromatinstruktur und Genexpression zu regulieren.
• Es existieren mehrere alternativ gespleißte Isoformen; die Isoformen 1, 3 und möglicherweise 2 sind funktionell, während den Isoformen 4 und 5 konservierte Methyltransferase-Motive fehlen und sie wahrscheinlich katalytisch inaktiv sind.
• Neben seiner katalytischen Funktion wirkt DNMT3B als transkriptioneller Korepressor, indem es mit CBX4 und ZHX1 interagiert und eine von der Methylierungsaktivität unabhängige Genstilllegung vermittelt.
• In Verbindung mit DNMT1 und dem Faktor CTCFL/BORIS moduliert DNMT3B die Dimethylierung von Histon H3K4 und H3K9 am BAG1-Promotor und trägt zur Transkriptionsaktivierung bei.
• DNMT3B ist für die Stilllegung des DUX4-Gens in somatischen Zellen erforderlich; seine Fehlregulation steht mit der fazioskapulohumeralen Muskeldystrophie Typ 4 (FSHD4) in Verbindung. Zugehörige Referenzen: PMID:27153398
• DNMT3B ist im Zellkern lokalisiert und wird weitgehend exprimiert, mit hohen Konzentrationen in fötaler Leber, Herz, Niere und Plazenta sowie niedrigeren Konzentrationen in adulten Geweben wie Gehirn und Skelettmuskulatur. Isoform 1 fehlt im Gehirn, in der Skelettmuskulatur und in PBMC.
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung und Citrullinierung, können die Stabilität und Aktivität von DNMT3B beeinflussen; außerdem wird es durch eine ubiquitinähnliche Konjugation modifiziert.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 206–360 des humanen DNMT3B, einer Region, die einen Teil der PWWP-Domäne enthält; überprüfen Sie die Expression funktioneller Isoformen in Ihrem Probensystem, um eine zuverlässige Detektion sicherzustellen.
• Beim Western Blot (WB) ist eine Bande bei etwa 96 kDa zu erwarten; validieren Sie die Spezifität mit DNMT3B-Knockout- oder -Knockdown-Kontrollen, da einige Isoformen bei unterschiedlichen Größen migrieren können.
• Optimieren Sie für ChIP sorgfältig die Vernetzung, Fragmentierung und Antikörperkonzentration, da DNMT3B ein mit dem Kernchromatin assoziiertes Protein ist; schließen Sie geeignete Negativregionen ein.
• Erstellen Sie beim ELISA mit dem rekombinanten Immunogen eine Standardkurve, um die Linearität zu beurteilen; der Antikörper kann auch für den Fang oder die Detektion in einem Sandwich-ELISA mit passenden Antikörperpaaren verwendet werden.
• Da DNMT3B in vielen Geweben nur in geringer Konzentration exprimiert wird, sollten Sie für eine empfindliche Detektion eine Anreicherung der Kernfraktion oder eine hohe Proteinbeladung in Betracht ziehen.
• Eine Kreuzreaktivität mit nichtmenschlichen Spezies wurde nicht berichtet; validieren Sie das Produkt im entsprechenden System, wenn es über humane Proben hinaus eingesetzt wird.

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