Anti-DNMT1 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IP, ELISA - P26358

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: DNMT1-Funktion und Lokalisierung

• Proteinidentität und Isoformen: DNMT1 (DNA (Cytosin-5)-Methyltransferase 1) ist ein CXXC-Typ Zinkfingerprotein mit den Aliasen MCMT, CXXC9 und DNA-Methyltransferase HsaI. Es existieren mehrere Isoformen; Isoform 2 ist weniger exprimiert als die kanonische Isoform 1.
• Erhaltungs-DNA-Methylierung: Fungiert als primäre Erhaltungs-DNA-Methyltransferase, die bevorzugt hemimethylierte CpG-Stellen methyliert, um Methylierungsmuster während der DNA-Replikation zu bewahren. Assoziiert mit Replikationsfoci in der S-Phase. Verwandte Referenzen: PMID:17200670, PMID:21745816, PMID:26070743
• Chromatin-Assoziation während des Zellzyklus: Zusätzlich zur S-Phase-Assoziation bindet DNMT1 während der G2- und M-Phase an Chromatin, was zur replikationsunabhängigen Erhaltung der DNA-Methylierung beiträgt. Verwandte Referenzen: PMID:21745816
• Transkriptionelle Repression: Vermittelt transkriptionelle Repression durch direkte Interaktion mit HDAC2 und koordiniert DNA-Methylierung mit Histonmodifikationen, um die Genexpression zu regulieren. Verwandte Referenzen: PMID:10888872, PMID:16357870
• Doppelrolle bei Gen-Stilllegung und Aktivierung: Bildet Corepressor-Komplexe, die KRAS-vermittelte Hypermethylierung und Stilllegung von Tumorsuppressorgenen in Darmkrebszellen fördern; erhält auch repressive Chromatinzustände in embryonalen Stammzellen aufrecht. Umgekehrt kann es an Genaktivierung (z.B. BAG1) durch Modulation von Histon H3K4- und H3K9-Dimethylierung im Komplex mit DNMT3B und CTCFL/BORIS teilnehmen. Verwandte Referenzen: PMID:24623306, PMID:18413740
• Subzelluläre Lokalisierung und Gewebeexpression: Vorwiegend nukleär, assoziiert mit Chromosomen. Ubiquitär exprimiert; hoch abundant in fetalen Geweben, Herz, Niere, Plazenta und peripheren mononukleären Blutzellen, mit geringeren Mengen in Milz, Lunge, Gehirn, Dünndarm, Kolon, Leber und Skelettmuskel.
• Posttranslationale Modifikationen und Krankheitsassoziationen: Unterliegt Acetylierung, Phosphorylierung und Ubiquitinierung. Mutationen in DNMT1 sind mit hereditärer sensorischer Neuropathie und autosomal-dominanter zerebellärer Ataxie, Taubheit und Narkolepsie (ADCADN) assoziiert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 1–100 am N-Terminus von humanem DNMT1; ziehen Sie bei Bedarf einen Peptid-Blockierungsassay zur Bestätigung der Spezifität in Betracht.
• Für den Western Blot beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht ~183 kDa. Verwenden Sie ein Gel mit niedrigem Acrylamidanteil (z.B. 6–8%) und optimieren Sie die Transferbedingungen für hochmolekulare Proteine.
• Bei IHC-P führen Sie eine geeignete Antigen-Demaskierung durch und validieren Sie die Färbung unter Verwendung positiver und negativer Gewebekontrollen (z.B. Herz, Plazenta oder Kolon).
• Es wird berichtet, dass der Antikörper mit humanen, murinen und Rattenschnitten kreuzreagiert. Bei der Erweiterung auf andere Spezies überprüfen Sie die Reaktivität experimentell.
• Für Immunpräzipitation und ELISA befolgen Sie Standardprotokolle und schließen geeignete Kontrollen ein, um mögliche unspezifische Bindung zu berücksichtigen.

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