Anti-DNA-Topoisomerase I (TOP1) monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P11387

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der DNA-Topoisomerase I

• DNA-Topoisomerase 1 (TOP1) ist ein monomeres Enzym, das vom TOP1-Gen (GenID: 7150) kodiert wird. Es ist auch als DNA-Topoisomerase I bekannt und wird als Typ-IB-Topoisomerase klassifiziert.
• TOP1 löst DNA-Supercoilings und Torsionsspannungen, die während der Replikation und Transkription entstehen, durch vorübergehendes Schneiden und Wiederverbinden eines Strangs der DNA-Duplex, wodurch eine kontrollierte Rotation des gebrochenen Strangs um den intakten Strang ermöglicht wird (Nach Ähnlichkeit).
• TOP1 bildet durch Transesterifizierung ein kovalentes DNA-(3′-Phosphotyrosyl)-Enzym-Intermediat und religiert die DNA nach der Entfernung des Supercoilings; diese Aktivität ist für den DNA-Stoffwechsel essentiell.
• Über seine kanonische Rolle hinaus reguliert TOP1 das alternatives Spleißen der prä-mRNA des Gewebefaktors (F3) in Endothelzellen und ist an der zirkadianen Transkription beteiligt, indem es die Chromatinstruktur am BMAL1-Promoter moduliert.
• Das Protein lokalisiert im Zellkern, spezifisch im Nukleolus und Nukleoplasma, was mit seinen Rollen bei der DNA-Transkription und -Replikation übereinstimmt.
• TOP1 unterliegt verschiedenen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung und Phosphorylierung, und ist ein Substrat für ubiquitin-ähnliche Konjugation.
• Es wird in Endothelzellen exprimiert und wurde mit chromosomalen Umordnungen und Wirt-Virus-Interaktionen in Verbindung gebracht, was seine breitere biologische und klinische Bedeutung unterstreicht.
• Die berechnete molekulare Masse beträgt ca. 91 kDa, was mit der beobachteten Bande beim Western Blot übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper wurde gegen ein N-terminales Peptid (aa 1–100) hergestellt; daher wird erwartet, dass er die volle Länge von TOP1 erkennt und möglicherweise auch N-terminale Varianten nachweist. Überprüfen Sie die Spezifität im entsprechenden experimentellen System.
• TOP1 ist vorwiegend nukleär; effektive Kernextraktions- sowie Fixierungs/Permeabilisierungsprotokolle (z. B. Behandlung mit Triton X-100) werden für IHC-P und IF/ICC empfohlen.
• Für WB verwenden Sie reduzierende Bedingungen; die vorhergesagte Bande erscheint in der Nähe von 91 kDa. Fügen Sie geeignete positive Kontrollen wie HeLa- oder Endothelzelllysate hinzu.
• Dieser Kaninchen-monoklonale Antikörper bietet hohe Spezifität und geringen Hintergrund; jedoch sollten die optimalen Antikörperverdünnungen empirisch für jede Anwendung und jeden Probentyp bestimmt werden.
• IP- und ELISA-Protokolle erfordern möglicherweise eine Optimierung der Antikörperkonzentration und der Inkubationsbedingungen; erwägen Sie eine Vernetzung des Antikörpers mit dem Harz für die IP.

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