Anti-DNA-Polymerase gamma Monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - P54098

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der DNA-Polymerase gamma

• Die DNA-Polymerase-Untereinheit Gamma-1 (POLG) ist der katalytische Kern der mitochondrialen DNA-Polymerase, die für die Replikation des gesamten mitochondrialen Genoms verantwortlich ist. Sie synthetisiert sowohl den schweren als auch den leichten Strang unter Verwendung von einsträngiger DNA als Vorlage und RNA-Primern und fungiert als hochprozessiver Replisom-Komplex zusammen mit der TWNK-Helikase und SSBP1. Verwandte Referenzen: PMID:11477093, PMID:11897778, PMID:15917273
• POLG besitzt eine 3'→5' Exonuklease-Korrekturleseaktivität, die Basensubstitutionen, Einzelbasenzusätze und Deletionen korrigiert und so eine hohe Treue während der mtDNA-Replikation gewährleistet. Wenn eine Fehleinbau erfolgt, wechselt das Enzym in einen nukleolytischen Editiermodus, um das fehlerhafte Nukleotid zu entfernen. Verwandte Referenzen: PMID:10827171, PMID:11477094, PMID:11504725
• Nach Abschluss der mtDNA-Synthese vermittelt POLG einen 3'→5' exonukleolytischen Abbau am Nick, um eine ordnungsgemäße Ligation zu erleichtern, und zeigt zudem eine 5'-Desoxyribosephosphat (dRP)-Lyase-Aktivität, die ihre Beteiligung am mitochondrialen Basenexzisionsreparaturweg ermöglicht. Verwandte Referenzen: PMID:9770471, PMID:11477093, PMID:15167897
• Mutationen im POLG-Gen sind mit einer Reihe mitochondrialer Erkrankungen verbunden, einschließlich progressiver externer Ophthalmoplegie (PEO), Neuropathien, Epilepsie und Leigh-Syndrom. Es ist ein primäres mitochondriales Krankheitsgen, das mit Syndromen der mtDNA-Depletion und -Deletion assoziiert ist.
• Das Protein lokalisiert sich in der mitochondrialen Matrix und ist eine Komponente des mitochondrialen Nukleoids, wo es sich mit mtDNA assoziiert, um Replikation und Erhaltung zu erleichtern.
• POLG ist ein großes, multifunktionales Enzym (ca. 140 kDa), das zur Familie der DNA-Polymerasen Typ A gehört. Es benötigt Magnesiumionen für die Polymerase- und Exonuklease-Aktivitäten.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das zur Erzeugung dieses Antikörpers verwendete Immunogen entspricht einem Peptid innerhalb der C-terminalen Region (Aminosäuren 1140–1239) des humanen POLG. Dieses Epitop liegt außerhalb der katalytischen Domänen und kann die Erkennung sowohl des Wildtyps als auch einiger Mutantenformen ermöglichen. Überprüfen Sie jedoch für jedes experimentelle System die Epitop-Zugänglichkeit unter nativen und denaturierenden Bedingungen.
• Für den Western Blot beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht 140 kDa. Verwenden Sie einen geeigneten Gel-Prozentsatz und Transferbedingungen für hochmolekulare Proteine und schließen Sie eine Positivkontrolle wie mitochondriale Lysate aus menschlichen oder Mauszellen ein.
• Eine Kreuzreaktivität mit Maus-POLG wurde bestätigt, wodurch dieser Antikörper für Studien in Mausmodellen der mitochondrialen Erkrankung geeignet ist. Aufgrund der hohen Sequenzkonservierung ist eine Kreuzreaktivität mit anderen Arten möglich, sollte aber empirisch validiert werden.
• Für ELISA kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden. Titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Arbeitskonzentration zu bestimmen, und stellen Sie sicher, dass das Beschichtungsantigen das C-terminale Epitop oder ein rekombinantes POLG-Fragment enthält, das die Immunogenregion überdeckt.
• Beachten Sie, dass die POLG-Expression ubiquitär ist, aber in Geweben mit hohem Energiebedarf angereichert ist. Erwägen Sie die Validierung der Detektionsempfindlichkeit in relevanten Probensystemen, wie z. B. mitochondrialen Präparationen aus Leber, Muskel oder Gehirn.

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