Anti-DNA-PKcs Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IP, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P78527

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von DNA-PKcs

• DNA-PKcs (katalytische Untereinheit der DNA-abhängigen Proteinkinase), auch als DNPK1, p460, HYRC oder XRCC7 bezeichnet, wird vom PRKDC-Gen (Gen-ID: 5591) kodiert und dient als die katalytische Untereinheit des DNA-PK-Komplexes.
• Als Serin/Threonin-Proteinkinase fungiert es als molekularer Sensor für DNA-Schäden und ist für die nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), den Hauptweg zur Reparatur von Doppelstrangbrüchen (DSBs) und V(D)J-Rekombination, unerlässlich. Die DNA-Bindung ist für seine katalytische Aktivität erforderlich, und es wird von XRCC5/Ku80 und XRCC6/Ku70 an DNA-Enden rekrutiert, wo es die gebrochenen Enden schützt, ausrichtet und isoliert, um Verfall zu verhindern (PubMed:11955432, PubMed:12649176, PubMed:14734805). Verwandte Referenzen: PMID:11955432 PMID:12649176 PMID:14734805
• DNA-PKcs phosphoryliert zahlreiche Substrate am Konsensusmotiv [ST]-Q, einschließlich Histon H2AX an 'Ser-139', um die DNA-Schadensantwort zu regulieren (PubMed:14627815, PubMed:16046194), sowie p53/TP53, XRCC4, XRCC5, XRCC6 und AKT1 an 'Ser-473', um das Zellüberlebenssignal zu fördern (PubMed:10026262, PubMed:10467406, PubMed:11889123, PubMed:15262962). Verwandte Referenzen: PMID:14627815 PMID:16046194 PMID:10026262 PMID:10467406 PMID:11889123 PMID:15262962
• Über die DSB-Reparatur hinaus trägt DNA-PKcs zur Telomer-Wartung bei und verhindert die Fusion von Chromosomenenden (Aufgrund von Ähnlichkeit).
• Es moduliert auch die Transkription (PubMed:11955432, PubMed:12649176, PubMed:14734805) und fördert die frühe Ribosomenmontage durch Verarbeitung der Vorläufer-rRNA zu reifer 18S-rRNA im Small-Subunit-Processosome, wobei es mit U3-snoRNA interagiert (PubMed:32103174). Verwandte Referenzen: PMID:11955432 PMID:12649176 PMID:14734805 PMID:32103174
• In der angeborenen Immunität reguliert DNA-PKcs den cGAS-STING-Weg durch Phosphorylierung von CGAS und PARP1 und ist Teil des HDP-RNP-Komplexes, der IRF3 aktiviert (PubMed:28712728, PubMed:33273464, PubMed:35460603). Verwandte Referenzen: PMID:28712728 PMID:33273464 PMID:35460603
• Das Protein ist vorwiegend im Zellkern und Nukleolus lokalisiert, mit einer gewissen Präsenz im Zytosol, und unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 3993–4128 von menschlichem DNA-PKcs, eine C-terminale Region; berücksichtigen Sie diesen Epitoport bei der Kombination mit anderen Antikörpern oder der Gestaltung von Nachweisstrategien.
• Für Western Blotting hat das Ziel ein vorhergesagtes Molekulargewicht von 469 kDa; sorgen Sie für einen angemessenen Gel-Prozentsatz (z. B. 6 % Polyacrylamid) und verlängerte Transferzeiten, um ein effizientes Blotting zu erleichtern.
• Obwohl für mehrere Anwendungen validiert, sollten optimale Verdünnungen empirisch im experimentellen System des Endbenutzers bestimmt werden, beginnend mit den in Standardprotokollen empfohlenen Konzentrationsbereichen.
• Eine Kreuzreaktivität wird für menschliche Proben berichtet; für nicht-menschliche Gewebe oder Zelllinien führen Sie vor der Verwendung eine kreuzspezifische Sequenzalignment durch und validieren Sie mit geeigneten Kontrollen.
• Da DNA-PKcs ein Kernprotein ist, passen Sie die Fixierungs- und Permeabilisierungsschritte für die Immunfluoreszenz oder Immunhistochemie an, um eine korrekte Antigenzugänglichkeit zu gewährleisten.

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