Anti-DLAT monoklonaler Kaninchen-Antikörper für WB, ELISA - P10515

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: DLAT-Funktion und Lokalisierung

• DLAT kodiert die Dihydrolipoyllysin-Rest-Acetyltransferase-Komponente des Pyruvat-Dehydrogenase-Komplexes (PDC-E2). Es ist auch bekannt als das 70 kDa mitochondriale Autoantigen der primär biliären Cholangitis (PBC), M2-Antigen-Komplex 70 kDa Untereinheit und PDCE2.
• Als Teil des Pyruvat-Dehydrogenase (PDH)-Komplexes katalysiert DLAT den Transfer von Acetylgruppen von Acetyl-Lipoyl-Resten auf Coenzym A, wodurch Acetyl-CoA gebildet wird. Diese Reaktion verbindet die zytoplasmatische Glykolyse mit dem mitochondrialen Tricarbonsäurezyklus (TCA-Zyklus).
• Der PDH-Komplex ist eine große Multienzym-Anordnung, die mehrere Kopien von drei Enzymen enthält: Pyruvat-Dehydrogenase (E1), Dihydrolipoamid-Acetyltransferase (E2) und Dihydrolipoamid-Dehydrogenase (E3). DLAT fungiert als E2-Komponente.
• DLAT lokalisiert in der mitochondrialen Matrix, wo der PDH-Komplex aktiv ist.
• Das Protein unterliegt der Lipoylierung und Acetylierung, posttranslationale Modifikationen, die für seine enzymatische Funktion und Regulation essentiell sind.
• DLAT ist eine Transferase, die eine Schlüsselrolle im Kohlenhydrat- und Glukosestoffwechsel spielt, insbesondere im TCA-Zyklus.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das den Aminosäuren 548–647 des humanen DLAT entspricht, einer C-terminalen Region. Berücksichtigen Sie dieses Antigendesign bei der Bewertung der Epitopspezifität.
• Beim Western Blot wird eine erwartete Bande bei etwa 69 kDa beobachtet (theoretisches Molekulargewicht ~69 kDa). Die Verwendung von mitochondrial angereicherten Lysaten kann die Nachweisempfindlichkeit erhöhen.
• Validieren Sie die Reaktivität in den relevanten Spezies: Zelllinien oder Gewebeextrakte von Mensch, Maus und Ratte. Fügen Sie geeignete Positiv- und Negativkontrollen hinzu.
• Für ELISA-Anwendungen sollten Sie die Verwendung von rekombinantem DLAT-Protein oder Peptid-Beschichtung in Betracht ziehen; optimieren Sie die Antikörperverdünnung und das Nachweissystem für Ihr spezifisches Assay-Format.
• Da DLAT ein mitochondriales Enzym ist, stellen Sie sicher, dass die Protokolle zur Probenvorbereitung mitochondriale Proteine effektiv extrahieren.

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