Anti-DKK3 Kaninchen-Monoklonalantikörper für WB/IF/ICC/ELISA - Q9UBP4

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: DKK3-Funktion und -Lokalisierung

• DKK3 (Dickkopf-related protein 3), auch bekannt als REIC oder RIG, ist ein sekretiertes Glykoprotein, das zur Dickkopf-Familie der Wnt-Antagonisten gehört. Es enthält ein Signalpeptid, zwei cysteinreiche Domänen und Coiled-Coil-Regionen.
• DKK3 antagonisiert den kanonischen Wnt/β-Catenin-Signalweg, indem es an die Korezeptoren LRP5/6 bindet und deren Internalisierung über die transmembranen Proteine KREMEN fördert, wodurch die Wechselwirkung zwischen Wnt-Ligand und -Rezeptor gehemmt wird.
• Dieses Protein spielt eine kritische Rolle bei der embryonalen Entwicklung, einschließlich der anteroposterioren Achsenmusterbildung, der Gliedmaßenmorphogenese, der Somitogenese und der Augenbildung, durch lokale Modulation der Wnt-Aktivität.
• In adulten Geweben ist DKK3 an der Knochenhomöostase, der Tumorsuppression (häufig herunterreguliert bei Krebs) und neurodegenerativen Prozessen wie der Alzheimer-Krankheit beteiligt, wobei die letzteren Funktionen aus der Ähnlichkeit abgeleitet wurden.
• Die subzelluläre Lokalisierung ist ausschließlich extrazellulär: DKK3 wird in den extrazellulären Raum sezerniert und scheint nicht membrangebunden oder intrazellulär zu sein.
• Die Expression ist am höchsten in Herz, Gehirn und Rückenmark, mit niedrigeren Werten in anderen Geweben, was auf gewebespezifische regulatorische Funktionen hindeutet.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen N-Glykosylierung und die Bildung von Disulfidbrücken, was typisch für sekretierte Cystein-Knot-Proteine ist und deren Stabilität und Aktivität beeinflussen kann.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 200–350 von humanem DKK3 und deckt die C-terminale Region ab, die reich an Coiled-Coil-Motiven ist. Diese Region kann vollständiges DKK3 und möglicherweise einige Spaltprodukte nachweisen; überprüfen Sie das Molekulargewicht in Ihrem System.
• Für Western Blot (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht ca. 38 kDa (berechnet aus der Aminosäuresequenz). Glykosylierung kann dazu führen, dass die beobachtete Bande etwas höher wandert. Verwenden Sie geeignete Kontrollen.
• Für Immunfluoreszenz/Immunzytochemie (IF/ICC): Da DKK3 ein sekretiertes Protein ist, kann die Zugabe eines Golgi-Blockers (z. B. BFA) die intrazelluläre Färbung verstärken, wenn eine Retention erwünscht ist; andernfalls sollten Sie die Analyse von sezerniertem DKK3 im Zellüberstand mittels ELISA in Betracht ziehen.
• Der Antikörper wurde auf ELISA-Anwendungen getestet; er kann je nach Assay-Format für Antigen-Capture oder -Detektion verwendet werden. Führen Sie Kreuzreaktivitätstests mit Ihrer spezifischen Matrix durch.
• Trotz der berichteten Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte ist die Sequenzhomologie in der Immunogenregion hoch; validieren Sie dennoch die Reaktivität in speziespezifischen Geweben.
• Titrieren Sie den Antikörper immer unter Ihren Assay-Bedingungen, um ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis zu erzielen.

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