Anti-DiMethyl-DNMT3A-K44 (O88508) Kaninchen polyklonaler Antikörper für IF/ICC und ELISA

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation der DNA (Cytosin-5)-Methyltransferase 3A (DNMT3A)

• DNMT3A ist ein Schlüsselenzym für die genomweite de novo DNA-Methylierung, das für die Etablierung von Methylierungsmustern während der Entwicklung unerlässlich ist. Es modifiziert DNA auf nicht-prozessive Weise und kann sowohl CpG- als auch Nicht-CpG-Stellen methylieren.
• Das Enzym wirkt in Koordination mit Histonmodifikationen, methyliert bevorzugt Linker-DNA zwischen Nukleosomen und wird durch Histon H1 gehemmt. Es spielt auch eine Rolle bei der väterlichen und mütterlichen Prägung (Imprinting), wobei die meisten geprägten Loci in Keimzellen methyliert werden.
• DNMT3A wirkt als transkriptioneller Korepressor, zum Beispiel durch Interaktion mit ZBTB18, und kann die Transkription durch Rekrutierung von HDAC-Aktivität reprimieren. Es wird an genomische Regionen rekrutiert, die durch trimethyliertes Histon H3 an Lys36 (H3K36me3) markiert sind.
• Subzellulär ist DNMT3A überwiegend im Zellkern lokalisiert, assoziiert mit Chromosomen und reichert sich in perizentrischen Heterochromatin-Major-Satelliten-Wiederholungen an. Es kann auch im Zytoplasma nachgewiesen werden.
• Es existieren zwei Isoformen: Isoform 1 wird ubiquitär in geringen Mengen exprimiert, während die Expression von Isoform 2 auf Gewebe beschränkt ist, die eine aktive de novo Methylierung durchlaufen, wie Milz, Hoden und Thymus.
• Das Protein erfährt multiple posttranslationale Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung (z. B. an Ser102, Ser239, Ser251, Ser386, Ser389, Thr120, Thr257), Methylierung (z. B. omega-N-Methylarginin an Arg167) und Auto-Methylierung an Cys706.

Verwandte Referenzen: PMID:10555141, PMID:11399089, PMID:11919202, PMID:16567415, PMID:17713477, PMID:9662389, PMID:11350943, PMID:18823905, PMID:15215868, PMID:20547484, PMID:21481189, PMID:12138111, PMID:15456878, PMID:21183079, PMID:24129315

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das an Lys44 von Maus-DNMT3A dimethyliert ist. Beachten Sie für IF/ICC, dass diese Modifikation kontextspezifisch sein kann; validieren Sie in Ihrem System durch den Vergleich der Signale zwischen Blockierung mit methyliertem und unmethyliertem Peptid oder durch Verwendung von Knockout-/Knockdown-Kontrollen.
• Bei ELISA-Anwendungen kann die Verwendung des immunisierenden Peptids als Positivkontrolle und eines unmodifizierten Peptids als Negativkontrolle helfen, die Dimethyl-Spezifität zu bestätigen.
• Aufgrund der Kreuzreaktivität mit Mensch und Ratte ist dieser Antikörper möglicherweise für die Untersuchung konservierter Methylierungsstellen über Spezies hinweg geeignet, bestätigen Sie jedoch die spezies-spezifische Reaktivität in Ihren Assays.
• Optimale Arbeitsverdünnungen sollten empirisch bestimmt werden; typische Bereiche für IF/ICC und ELISA sind anwendungsabhängig und müssen vom Endnutzer optimiert werden.

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