Anti-DHFR-Polyklonaler Antikörper für WB - P00374

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: DHFR-Funktion und -Lokalisierung

• DHFR katalysiert die NADPH-abhängige Reduktion von 7,8-Dihydrofolat zu 5,6,7,8-Tetrahydrofolat, einen kritischen Schritt im Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel. Verwandte Referenzen: PMID:12096917 PMID:15039552 PMID:17569517
• Diese Reaktion ist essentiell für die de novo-Synthese von Thymidylat, Glycin und Purinen und stellt DNA-Vorstufen für nukleäre und mitochondriale Genome bereit. Verwandte Referenzen: PMID:21876188 PMID:22235121
• DHFR lokalisiert im Zytoplasma, in den Mitochondrien und im Zellkern und unterstützt den Folsäurestoffwechsel über mehrere zelluläre Kompartimente hinweg.
• Das Enzym ist weitgehend in fetalen und adulten Geweben exprimiert, mit höheren Spiegeln im adulten Gehirn und im Vollblut.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, und Mutationen im DHFR sind mit Methotrexat-Resistenz und Krankheitsvarianten assoziiert.
• DHFR bindet an seine eigene mRNA und an die von DHFR2, was auf eine potenzielle regulatorische Rolle bei der posttranskriptionellen Genexpression hindeutet.
• Das Protein unterliegt Ubiquitinierung und wurde in großangelegten proteomischen Screenings identifiziert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen deckt das全长-menschliche DHFR (aa 1-187) ab, was auf eine potenzielle Reaktivität mit dem nativen Protein über Spezies hinweg mit hoher Homologie hindeutet (bestätigt für Mensch und Maus). Validieren Sie dies in Ihrem Probensystem.
• Für Western Blotting ist ein Band bei ~21 kDa zu erwarten. Optimieren Sie Blockierungs- und Detektionsbedingungen und fügen Sie geeignete Ladungskontrollen hinzu.
• Für Immunfluoreszenz/ICC sollten Sie Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle in Betracht ziehen, die die mitochondriale und nukleäre DHFR-Lokalisierung erhalten.
• Bei der Durchführung eines ELISA können rekombinant exprimiertes DHFR oder Zelllysate als Antigene dienen; eine Titration des Antikörpers wird empfohlen.
• Die DHFR-Expression variiert je nach Gewebe und Zellzyklusstadium; fügen Sie relevante positive und negative Kontrollen in Ihre Experimente ein.
• Da es sich um einen polyklonalen Antikörper handelt, bewerten Sie die Chargen-zu-Chargen-Konsistenz und erwägen Sie die Verwendung eines Blockierungspeptids, um die Spezifität zu bestätigen.

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