Anti-DDX21 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9NR30

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: DDX21-Funktion und Lokalisierung

• DDX21, auch bekannt als nukleoläre RNA-Helikase 2, Gu-alpha und DEAD-Box-Protein 21, ist ein Mitglied der DEAD-Box-RNA-Helikase-Familie mit einem vorhergesagten Molekulargewicht von ~87 kDa (UniProt: Q9NR30).
• Im Nukleolus lokalisiert DDX21 an ribosomale DNA-Loci und bindet direkt rRNAs und kleine nukleoläre RNAs (snoRNAs), fördert die rRNA-Transkription, -Verarbeitung und 2'-O-Methylierung, indem es die Rekrutierung von snoRNAs erleichtert. Verwandte Referenzen: PMID:25470060 , PMID:25477391
• Im Nukleoplasma bindet DDX21 an 7SK-RNA und wird an RNA-Polymerase-II-transkribierte Genpromotoren rekrutiert, wo es auf Helikase-abhängige Weise die Freisetzung von P-TEFb aus dem inhibitorischen 7SK-snRNP-Komplex erleichtert und so die Transkription verstärkt. Verwandte Referenzen: PMID:25470060
• DDX21 wirkt als transkriptioneller Kofaktor für JUN und ist für die Phosphorylierung von JUN an Ser-77 erforderlich. Verwandte Referenzen: PMID:11823437 , PMID:25260534
• Das Protein zeigt ATP-abhängige RNA-Helikase-Aktivität (Entwindung von doppelsträngiger RNA) und RNA-Foldase-Aktivität (Einführung von Sekundärstruktur in einzelsträngige RNA). Verwandte Referenzen: PMID:9461305
• Deacetylierung durch SIRT7 aktiviert die DDX21-Helikase-Funktion, wodurch es R-Loop-vermittelte RNA-Polymerase-Stottern überwinden und transkriptionsassoziierten DNA-Schaden verhindern kann. Verwandte Referenzen: PMID:28790157
• DDX21 ist eine Komponente eines cytoplasmatischen Multi-Helikase–TICAM1-Komplexes, der virale doppelsträngige RNA erkennt und zur angeborenen antiviralen Immunität beiträgt.
• Subzellulär ist DDX21 primär nukleolär und nukleoplasmatisch lokalisiert, kann aber unter bestimmten Bedingungen auch im Zytoplasma, Zytosol und in Mitochondrien vorkommen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 1–180 nahe dem N-Terminus von DDX21. Als ein gegen ein rekombinantes Fusionsprotein generierter Kaninchen-polyklonaler Antikörper kann er mehrere Epitope innerhalb dieser Region erkennen.
• Für Western Blot (WB) unter denaturierenden Bedingungen wird ein Band erwartet, das dem Voll-Längen-Protein bei etwa 87 kDa entspricht. Lysate von humanen oder murinen Zelllinien mit bestätigter DDX21-Expression sollten als positive Kontrollen verwendet werden.
• Die vorherrschende nukleoläre und nukleoplasmatische Lokalisierung von DDX21 macht es für Immunfluoreszenz (IF/ICC) und Immunhistochemie (IHC-P) geeignet. Kernanreicherung und nukleoläre punktförmige Färbung können beobachtet werden; die Einbeziehung geeigneter Organellen-Marker zur Verifizierung wird empfohlen.
• Angesichts der breiten RNA-Bindung und der Multi-Domänen-Natur von DDX21 kann die Antikörperleistung mit Fixierungs-, Permeabilisierungs- und Antigen-Retrieval-Protokollen variieren. Es ist ratsam, diese Parameter für den spezifischen Zell- oder Gewebetyp zu optimieren.
• Für ELISA-Anwendungen kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden, nachdem eine Standardtitration zur Bestimmung der optimalen Arbeitskonzentrationen durchgeführt wurde.

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