Anti-DDOST polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P39656

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: DDOST-Funktion und Lokalisierung

• Proteinidentität und Isoformen: DDOST kodiert für die Dolichyl-Diphosphooligosaccharid-Protein-Glycosyltransferase 48 kDa-Untereinheit, auch als OST48, WBP1, AGER1 und CDG1R bezeichnet. Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen.
• Kern-Glykosylierungsfunktion: Das Protein ist eine essentielle Untereinheit des Oligosaccharyltransferase (OST)-Komplexes, der den en-bloc-Transfer eines vorgefertigten High-Mannose-Glykans (Glc3Man9GlcNAc2) von Dolichol-Pyrophosphat auf Asparaginreste in neu synthetisierten Polypeptiden im ER katalysiert (PubMed:31831667).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:31831667
• Cotranslationaler Mechanismus: Die OST-Aktivität ist mit der Proteintranslokation durch den Sec61-Translokon gekoppelt, was eine cotranslationale N-Glykosylierung auf der luminalen Seite der ER-Membran ermöglicht.
• OST-Komplexassemblierung: DDOST wird für die Assemblierung sowohl von STT3A- als auch STT3B-haltigen OST-Komplexen benötigt, die jeweils co- bzw. posttranslationale Glykosylierung vermitteln (PubMed:22467853).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:22467853
• Subzelluläre Lokalisierung: Das Protein ist ein integraler Membranbestandteil des endoplasmatischen Retikulums mit einem Signalpeptid und mehreren Transmembrandomänen.
• Klinische Relevanz: Mutationen in DDOST sind mit angeborenen Glykosylierungsstörungen assoziiert, was seine Bedeutung für die menschliche Gesundheit und Krankheit unterstreicht.
• Molekulargewicht: Das kanonische DDOST-Polypeptid hat eine berechnete Molekülmasse von etwa 50,8 kDa (UniProt), während das reife Protein in der SDS‑PAGE bei etwa 51 kDa wandert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen (rekombinantes Protein, das die Aminosäuren 40–300 abdeckt) entspricht der luminalen Domäne von humanem DDOST und erzeugt wahrscheinlich Antikörper, die sowohl native als auch denaturierte Epitope erkennen. Für WB sind denaturierende und reduzierende Bedingungen geeignet.
• Bei der Durchführung von IHC-P kann eine Antigen-Demaskierung durch Hitze oder enzymatische Behandlung die Detektion verbessern; die Einbeziehung eines bekannten positiven Kontrollgewebes wie Leber oder Pankreas wird empfohlen.
• Für ELISA kann der Antikörper für den direkten oder Capture-Nachweis von rekombinantem oder endogenem DDOST in Zell- und Gewebelysaten verwendet werden. Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-DDOST wurde berichtet, daher sind Titrationsexperimente für jede Spezies ratsam.
• Die Signaloptimierung kann eine empirische Bestimmung der Antikörperverdünnung erfordern. Beginnen Sie mit 1:500–1:2000 für WB und 1:200 für IHC-P und passen Sie sie nach Bedarf an.
• Da DDOST ein ubiquitär exprimiertes, im ER residierendes Protein ist, kann es als Ladekontrolle oder Referenzstandard für Glykosylierungsstudien dienen.

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