Anti-DARS Kaninchen-Polyclonale Antikörper für WB, IHC-P, IP, ELISA – P14868

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von DARS

• DARS, auch bekannt als Aspartyl-tRNA-Synthetase (AspRS) und zellproliferationsinduzierendes Gen 40-Protein, wird beim Menschen durch das Gen DARS1 kodiert. Es gehört zur Familie der Klasse-II-Aminoacyl-tRNA-Synthetasen, die eine grundlegende Rolle bei der Proteintranslation spielt.
• Das Enzym katalysiert die spezifische Bindung von Aspartat an seine korrespondierende tRNA in einer zweistufigen Reaktion: Zuerst wird Aspartat durch ATP zu Aspartyl-AMP aktiviert und anschließend auf das Akzeptorende der tRNA übertragen – ein entscheidender Schritt für die korrekte cytoplasmatische Proteinsynthese.
• DARS befindet sich überwiegend im Cytosol und ist für die Bereitstellung von Aspartyl-tRNA für die ribosomale Translation unerlässlich, was die Erhaltung des zellulären Proteoms und das Zellwachstum direkt beeinflusst.
• Gewebespezifische Expressionsanalysen zeigen hohe Gehalte im sich entwickelnden und erwachsenen Gehirn, insbesondere in den ventrikulären/subventrikulären Zonen, den Hippocampus-Subfeldern und der Großhirnrinde, mit bevorzugter neuronaler Expression. Auch periphere Neurone im Kolon exprimieren DARS.
• Proteomische Studien haben Acetylierung und Phosphorylierung von DARS nachgewiesen – posttranslationale Modifikationen, die seine enzymatische Aktivität, subzelluläre Verteilung oder Protein-Protein-Interaktionen modulieren können.
• Pathogene Mutationen in DARS sind mit Leukoenzephalopathie mit Beteiligung von Hirnstamm und Rückenmark und Laktaterhöhung (HBSL) verbunden, einer schweren neurologischen Erkrankung – dies unterstreicht die entscheidende Rolle des Enzyms im Zentralnervensystem.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Die Immunogen-Sequenz (AS 222–501) befindet sich innerhalb einer konservierten katalytischen Domäne von DARS; diese Region weist eine hohe Identität zwischen Mensch, Maus und Ratte auf, was die beobachtete Kreuzreaktivität unterstützt.
• Für das Western Blotting beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht etwa 57 kDa. Es wird empfohlen, den Antikörper mit Positivkontrollen wie HeLa-, HEK293- oder Maus-/Ratten-Gehirnlysaten zu validieren und sowohl reduzierende als auch nicht reduzierende Bedingungen zu berücksichtigen.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) sollten optimaler Antigen-Retrieval und Antikörper-Verdünnung empirisch bestimmt werden. DARS ist in Gehirngewebe hoch exprimiert; daher werden menschliche oder rodentische Gehirnschnitte für die anfängliche Validierung empfohlen.
• Bei der Durchführung der Immunpräzipitation kann die polyclonale Natur des Antikörpers die Erfassung nativer DARS-Komplexe verbessern. Fügen Sie geeignete Isotyp-Kontrollen und Vorreinigungsschritte hinzu, um den Hintergrund zu reduzieren.
• Für ELISA-Anwendungen kann der Antikörper sowohl als Capture- als auch als Detektionsreagenz verwendet werden. Titration und Kreuzreaktivitätsassays gegen eng verwandte Synthetasen werden empfohlen, um die Spezifität sicherzustellen.
• Knockdown- oder Knockout-Modelle können als Negativkontrollen zur Bestätigung der Antikörperspezifität dienen, insbesondere bei quantitativen Anwendungen, bei denen eine präzise Quantifizierung erforderlich ist.

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