Anti-DARPP32 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q9UD71

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: DARPP32 (PPP1R1B) Funktion und Lokalisierung

• DARPP32, codiert durch das PPP1R1B-Gen, ist ein bifunktionelles Signaltransduktionsmolekül, das Dopamin- und cAMP-Signale durch seine Regulation der Proteinphosphatase 1 (PP1) und der Proteinkinase A (PKA) integriert.
• Es wirkt als potenter Inhibitor von PP1, wenn es bei Thr34 durch PKA phosphoryliert wird, was zu einer veränderten Phosphorylierung nachgeschalteter neuronaler Substrate und einer Modulation der synaptischen Plastizität führt.
• Das Protein wird auch bei Thr75 durch die cyclinabhängige Kinase 5 (CDK5) phosphoryliert, wodurch es zu einem PKA-Inhibitor umgewandelt wird, was seine Rolle als molekularer Schalter in striatalen Neuronen verdeutlicht.
• DARPP32 ist vorwiegend zytoplasmatisch und stark in mittelstacheligen Neuronen des Striatums angereichert, wo es die Wirkungen von Dopamin, Glutamat und anderen Neurotransmittern vermittelt.
• Alternatives Spleißen der PPP1R1B-Transkripte ergibt mehrere Isoformen, einschließlich einer gut charakterisierten Vollängenform und einer truncierten Variante, die unterschiedliche funktionelle Eigenschaften haben können.
• Posttranslationale Modifikationen wie Acetylierung und Phosphorylierung an mehreren Stellen feinabstimmen seine Aktivität, Stabilität und subzelluläre Verteilung.
• Fehlregulierungen der DARPP32-Signalisierung wurden mit neurologischen und psychiatrischen Störungen in Verbindung gebracht, einschließlich Parkinson-Krankheit, Schizophrenie und Drogenmissbrauch.
• Das theoretische Molekulargewicht der kanonischen Isoform beträgt ca. 23 kDa, was mit dem beobachteten Band im Western Blot übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blot verwenden Sie frisch zubereiteten RIPA-Puffer, der Phosphatase- und Proteaseinhibitoren enthält, um den Phosphorylierungsstatus von DARPP32 zu erhalten.
• Erwägen Sie die Verwendung eines reduzierenden Ladepuffers und das Erhitzen der Proben bei 70 °C für 10 Minuten, um Aggregationsartefakte zu vermeiden, die häufig bei DARPP32 beobachtet werden.
• Das Immunogen entspricht der N-terminalen Region (aa1-100); dieser Antikörper sollte sowohl die Vollängenform als auch bestimmte N-terminale Fragmente erkennen.
• Validieren Sie aufgrund der hohen Sequenzkonservierung die Antikörperspezifität in Knockout- oder siRNA-Knockdown-Proben, insbesondere bei der Arbeit mit Maus- oder Rattengewebe.
• Für ELISA bestimmen Sie die optimale Beschichtungskonzentration durch Schachbrett-Titration unter Verwendung des immunisierenden Peptids oder rekombinanten DARPP32-Proteins als Standard.
• Schließen Sie in jedem Experiment eine bekannte Positivkontrolle (z. B. Striatum-Gewebelysat) und eine Negativkontrolle (z. B. nicht-neuronale Zelllinie) ein.
• Da DARPP32 in einigen Proben ein Phosphoprotein mit geringer Häufigkeit ist, können Signalverstärkungsstrategien wie die Verwendung von hochempfindlichen ECL-Substraten für den Nachweis erforderlich sein.

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