Anti-Cytohesin-1 (CYTH1) Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q15438

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Cytohesin-1 Funktion und Lokalisierung

• Cytohesin-1 (CYTH1) ist ein Mitglied der Cytohesin-Familie von Guanin-Nukleotid-Austauschfaktoren (GEFs), die ADP-Ribosylierungsfaktor (ARF) kleine GTPasen aktivieren und als entscheidender Regulator des intrazellulären vesikulären Trafficking dienen.
• Das Protein ist durch eine Pleckstrin-Homologie (PH)-Domäne für Phosphoinositid-Bindung, eine Sec7-Domäne, die für seine GEF-Aktivität verantwortlich ist, und eine Coiled-Coil-Domäne charakterisiert, die an Protein-Protein-Interaktionen beteiligt ist.
• CYTH1 katalysiert spezifisch den Guanin-Nukleotid-Austausch an ARF1, ARF5 und ARF6, indem es den Austausch von GDP gegen GTP fördert und dadurch deren Aktivierungszustand steuert.
• Durch die Regulation von ARF6 spielt es eine zentrale Rolle bei Membran-Trafficking-Ereignissen, die für die Umbildung von Zellverbindungen und die Etablierung der epithelialen Zellpolarität wesentlich sind.
• Es wird in allen Geweben ubiquitär exprimiert, was seine grundlegende Rolle bei zellulären Transportprozessen widerspiegelt.
• Subzellulär lokalisiert sich CYTH1 an die Zellmembran, das Zytosol und die Zell-Zell-Kontakte, einschließlich Tight Junctions und Adherens Junctions, was konsistent mit seinen Funktionen in der Membrandynamik und Zelladhäsion ist.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung und Ubiquitin-Konjugation, und die dreidimensionale Struktur des Proteins wurde aufgeklärt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen besteht aus den N-terminalen 70 Aminosäuren von humanem CYTH1, einem Bereich, der über Arten hinweg konserviert sein kann (was die Kreuzreaktivität des Antikörpers mit Maus und Ratte unterstützt) und möglicherweise in alternativen Spleiß-Isoformen erhalten bleibt.
• Für das Western Blotting wandert die erwartete Bande bei ca. 46 kDa; die optimale Antikörperverdünnung und Blockierungsbedingungen sollten empirisch unter Verwendung von Positivkontrollen-Lysaten (z. B. HeLa-, HEK293- oder U-2 OS-Zellen) bestimmt werden.
• Für die Immunfluoreszenz/Immunzytochemie werden Fixierungsmittel wie 4 % Paraformaldehyd und Permeabilisierung mit 0,1–0,3 % Triton X-100 empfohlen; die gewählte Methode sollte jedoch Membran- und Verbindungsstrukturen erhalten, an denen CYTH1 lokalisiert ist.
• Für ELISA-Anwendungen kann der Antikörper nach entsprechender Optimierung, einschließlich des Testens verschiedener Beschichtungs- und Blockierungsbedingungen, als Erfassungs- oder Nachweisreagenz eingesetzt werden.

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