Anti-CYP51A1 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - Q16850

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CYP51A1-Funktion und Lokalisation

• CYP51A1, auch bekannt als Lanosterol-14-alpha-Demethylase, gehört zur Cytochrom-P450-Superfamilie und ist das einzige Cytochrom-P450-Enzym, das in allen biologischen Reichen (Bakterien, Pilze, Pflanzen und Tiere) konserviert ist. Es ist ein Schlüsselenzym im Sterol-Biosyntheseweg, das für die Umwandlung von Lanosterol zu Cholesterin in Säugetieren verantwortlich ist.
• Katalytische Aktivität: Es katalysiert den dreistufigen oxidativen Abbau der 14alpha-Methylgruppe (C-32) von Sterolen wie Lanosterol und 24,25-Dihydrolanosterol, produziert Formiat und wandelt sie in 4,4-Dimethyl-5alpha-cholesta-8,14,24-trien-3beta-ol bzw. 4,4-Dimethyl-8,14-cholestadien-3beta-ol um. Dies sind kritische Zwischenprodukte in der Cholesterinbiosynthese. Verwandte Referenzen: PMID:20149798, PMID:8619637, PMID:9559662
• Das Enzym ist ein integrales Membranprotein, das im endoplasmatischen Retikulum und in mikrosomalen Membranen lokalisiert ist, was mit seiner Rolle im Lipidstoffwechsel übereinstimmt.
• Es enthält eine Häm-Prosthetische Gruppe und benötigt Eisen als Cofaktor, charakteristisch für die Monooxygenase-Aktivität, die molekularen Sauerstoff und NADPH nutzt.
• CYP51A1 zeigt eine breite Substratspezifität; neben Säugetiersterolen kann es auch nicht-säugetierische Substrate wie Eburicol demethylieren, wenn auch mit geringerer Effizienz. Verwandte Referenzen: PMID:9559662
• Das Protein wird ubiquitär exprimiert, wobei die höchsten Spiegel in Hoden, Eierstöcken, Nebennieren, Prostata, Leber, Niere und Lunge beobachtet werden, was den hohen Bedarf an Cholesterin in steroidogenen Geweben und für die Membransynthese widerspiegelt.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Transkriptvarianten, die möglicherweise die Enzymfunktion oder -regulation modulieren.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Ubiquitin-ähnliche (Ubl) Konjugation, die die Protein-Stabilität, Lokalisation oder Aktivität beeinflussen kann.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das verwendete Immunogen ist ein rekombinantes Protein, das den Aminosäuren 400-500 des humanen CYP51A1 entspricht und auf die C-terminale Region abzielt. Diese Region ist wahrscheinlich unter nativen und denaturierten Bedingungen gut exponiert, was den Antikörper für mehrere Anwendungen geeignet macht.
• Für die Western-Blot (WB)-Analyse wird eine Bande bei etwa 57 kDa erwartet. Ziehen Sie die Verwendung geeigneter Molekulargewichtsmarker in Betracht und validieren Sie die Spezifität mit CYP51A1-positiven Zelllinien oder Geweben (z. B. Leber, Hoden).
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) kann eine Antigen-Retrieval erforderlich sein. Testen Sie an bekannten Positivkontrollgeweben wie Leber oder Nebenniere und schließen Sie Isotypenkontrollen ein, um spezifische Färbemuster am endoplasmatischen Retikulum zu bestätigen.
• Für ELISA kann der Antikörper als Nachweis- oder Capture-Reagenz verwendet werden. Kombinieren Sie ihn mit einem geeigneten Standard, wie dem rekombinanten Immunogen oder gereinigtem CYP51A1-Protein, und validieren Sie ihn in der relevanten Probenmatrix.
• Angesichts der hohen Sequenzhomologie zwischen humanem, murinem und ratten CYP51A1 wird Kreuzreaktivität erwartet. Es wird jedoch empfohlen, bei der Verwendung für nicht-humane Proben eine experimentelle Validierung für jede Spezies durchzuführen.
• Bei der Handhabung lagern Sie bei den empfohlenen Temperaturen und vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Tau-Zyklen, um die Aktivität zu erhalten.

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