Anti-CTCF-Kaninchen-Monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IP, ELISA, ChIP, ChIP-seq, CUT&Tag - P49711

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CTCF-Funktion und Lokalisierung

• CTCF, auch bekannt als CCCTC-bindender Faktor oder 11-Zinkfinger-Protein, ist ein Chromatin-bindender Faktor, der an sequenzspezifische DNA-Stellen bindet und die 3D-Struktur des Chromatins durch die Bildung von Schleifen und die Verankerung der DNA an Kernstrukturen reguliert. Verwandte Referenzen: PMID:16949368, PMID:18347100, PMID:18654629
• Es definiert Grenzen zwischen aktiver und heterochromatischer DNA durch Bindung an Chromatin-Isolatoren, verhindert Interaktionen zwischen Promotoren und nahegelegenen Enhancern und Silencern und vermittelt so eine langreichweitige Gen-Stilllegung. Verwandte Referenzen: PMID:18347100, PMID:18654629, PMID:19322193
• CTCF ist an der allelspezifischen Genexpression am geprägten IGF2/H19-Locus beteiligt, vermittelt eine Chromatin-Konformation höherer Ordnung und schränkt den Enhancer-Zugang zu IGF2 auf dem maternalen Allel ein. Verwandte Referenzen: PMID:16107875, PMID:16815976, PMID:17827499
• Es spielt eine kritische Rolle bei der X-Chromosom-Inaktivierung, indem es einen regulierbaren epigenetischen Schalter etabliert und die Ausbreitung stabiler Methylierung an Escape-Genen verhindert. Verwandte Referenzen: PMID:11743158
• CTCF ist hauptsächlich im Zellkern lokalisiert und assoziiert während der Metaphase mit Zentromeren und chromosomalen Armen, wo es für die Cohesin-Lokalisierung und den Schwesterchromatiden-Zusammenhalt benötigt wird. Verwandte Referenzen: PMID:18550811, PMID:26321640
• Es fungiert als transkriptioneller Repressor von MYC und BAG1 und als transkriptioneller Aktivator von APP, was seine dualen regulatorischen Funktionen demonstriert. Verwandte Referenzen: PMID:8649389, PMID:9591631, PMID:9407128
• Das Protein enthält mehrere posttranslationale Modifikationsstellen, einschließlich Acetylierung, Phosphorylierung und Sumoylierung (Isopeptidbindung), die seine Chromatin-Bindungs- und transkriptionellen Aktivitäten regulieren.
• CTCF wird ubiquitär in humanen Geweben exprimiert, ist jedoch in primären Spermatozyten bemerkenswert abwesend, was auf gewebespezifische regulatorische Rollen hinweist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 628–727 in der C-terminalen Region von humanem CTCF, eine Domäne, die sich von der Zinkfinger-DNA-Bindungsregion unterscheidet, was die Antikörperspezifität für endogenes CTCF gegenüber anderen Zinkfingerproteinen potenziell erhöht.
• Für Western Blot wird eine erwartete Bande bei etwa 83 kDa vorhergesagt; die tatsächliche Wanderung kann aufgrund posttranslationaler Modifikationen oder Gelbedingungen abweichen, daher mit einer bekannten Positivkontrolle validieren.
• Für Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) und ChIP-seq die Vernetzungs- und Chromatin-Scherbedingungen für Ihren Zelltyp optimieren; positive (z.B. H19 ICR) und negative Kontrollgenomregionen zur Bewertung der Anreicherung einschließen.
• Bei der Durchführung von Immunfluoreszenz sollten Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle empirisch getestet werden, um eine robuste Kernfärbung sicherzustellen; eine subzelluläre Lokalisierung im Kern und an Zentromeren kann beobachtet werden.
• Der Antikörper ist für CUT&Tag geeignet und bietet eine effiziente Alternative zu ChIP-seq mit geringerer Zelleingabe; die Validierung der Enzym-Markierungsbedingungen und der Antikörperkonzentration wird für optimale Ergebnisse empfohlen.

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