Anti-CRY2 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q49AN0

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CRY2-Funktion und -Lokalisierung

• Cryptochrome-2 (CRY2) ist eine Kernkomponente der zirkadianen Uhr und wirkt als transkriptioneller Repressor im negativen Schenkel der Transkriptions-Translations-Feedback-Schleife (TTFL). Es interagiert mit dem CLOCK/BMAL1-Heterodimer, um dessen transkriptionelle Aktivität zu hemmen.
• Zusammen mit CRY1 reguliert CRY2 die zirkadiane Periode; während beide redundante Funktionen haben, besitzt CRY2 eine weniger starke Repressoraktivität im Kleinhirn und in der Leber und spielt eine kritische Rolle bei der Abstimmung der SCN-zirkadianen Periode durch Opposition zu den Aktionen von CRY1.
• CRY2 ist an der Modulation des Glucose- und Lipidstoffwechsels beteiligt, unterdrückt PPARD-Zielgene in der Skelettmuskulatur und reguliert Gene wie LEP und ACSL4.
• Es unterdrückt die durch Glucocorticoidrezeptoren (NR3C1/GR) induzierte transkriptionelle Aktivität durch Bindung an Glucocorticoid-Response-Elemente und unterdrückt auch die durch CLOCK-BMAL1 induzierte Transkription von BHLHE40/DEC1 und NAMPT.
• Subzellulär lokalisiert sich CRY2 sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern, was es ihm ermöglicht, als Teil der Uhrregulation zwischen den Kompartimenten zu wechseln.
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung und Ubiquitinierung, sind entscheidend für die Bestimmung der zirkadianen Periode (Tau) und der Stabilität von CRY2.
• CRY2 ist weitgehend in menschlichen Geweben exprimiert, mit den höchsten Spiegeln im Herzen und in der Skelettmuskulatur, und ist außerdem im Gehirn, in der Leber, in der Niere und vielen anderen vorhanden.
• Das Protein bindet FAD und kann photorezeptive Eigenschaften haben, obwohl seine primäre Rolle bei Säugetieren die transkriptionelle Regulation innerhalb des Uhrmechanismus ist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der C-terminalen Region (Aminosäuren 455-614), die unter denaturierenden Bedingungen gut exponiert sein kann; erwägen Sie die Verwendung von reduzierendem SDS-PAGE für Western Blots, um das 67 kDa-Band zu detektieren.
• Für Immunfluoreszenz/ICC optimieren Sie die Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle, da sich CRY2 sowohl im Zytoplasma als auch im Kern befindet; Methanol oder Paraformaldehyd mit Triton X-100 können unterschiedliche Ergebnisse liefern.
• ELISA kann zur Quantifizierung verwendet werden; erwägen Sie einen Sandwich-ELISA-Ansatz mit einem passenden Antikörperpaar und validieren Sie Linearität und Empfindlichkeit unter Verwendung von rekombinantem CRY2-Protein.
• Eine Kreuzreaktivität wurde für menschliche und Rattenproben bestätigt; bei Verwendung anderer Spezies führen Sie einen Sequenzalignment durch und validieren Sie im entsprechenden Probesystem.
• Verwenden Sie geeignete positive Kontrollen (z. B. HEK293-, HeLa-Zelllysate) und negative Kontrollen (siRNA-Knockdown oder Knockout-Proben), um die Antikörperspezifität zu bestätigen.

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