Anti-COX5B Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB - P10606

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von COX5B

• COX5B (Cytochrom-c-Oxidase-Untereinheit 5B) ist eine nuklear kodierte Untereinheit des mitochondrialen Komplexes IV (Cytochrom-c-Oxidase), dem terminalen Enzym der Elektronentransportkette.
• Es ist Bestandteil des multiuntereinheitigen Cytochrom-c-Oxidase-Komplexes, der die Reduktion von molekularem Sauerstoff zu Wasser katalysiert und diese Reaktion mit dem Protonenpumpen über die innere Mitochondrienmembran koppelt.
• Das COX5B-Protein wird mit einem mitochondrialen Transitpeptid synthetisiert, das nach dem Import in das Mitochondrium gespalten wird. Es entsteht eine reife Untereinheit, die sich in die innere Membran integriert.
• Die subzelluläre Lokalisation ist auf die mitochondriale Innenmembran beschränkt, wo es zur strukturellen und funktionellen Integrität des Komplexes IV beiträgt.
• Posttranslationelle Modifikationen umfassen die Acetylierung, und das reife Protein enthält eine Zinkbindungsstelle, wie das Vorhandensein eines Zinkions in der Kristallstruktur zeigt.
• Das theoretische Molekulargewicht des reifen humanen COX5B beträgt etwa 13,7 kDa, was mit der beobachteten 13 kDa-Bande auf SDS-PAGE übereinstimmt.
• Als Kernuntereinheit der Atmungskette ist COX5B essenziell für eine effiziente oxidative Phosphorylierung und ATP-Produktion, und seine Expression wird oft als Marker für Mitochondrienmasse und -aktivität verwendet.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 29–129 des humanen COX5B, was dem reifen prozessierten Protein ohne das mitochondriale Zielpeptid entspricht. Dies führt wahrscheinlich zur Erzeugung von Antikörpern, die die endogene prozessierte Form erkennen.
• Für das Western Blotting ist eine Bande um 13 kDa in Lysaten von mitochondriareichen Geweben von Mensch, Maus und Ratte (z. B. Herz, Skelettmuskel, Leber) zu erwarten. Verwenden Sie eine mit Mitochondrienfraktion angereicherte Probe für eine optimale Detektion.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollte die Färbung ein punktförmiges zytoplasmatisches Muster ergeben, das mit der mitochondrialen Lokalisation übereinstimmt. Eine Gegenfärbung mit einem Mitochondrienmarker wird zur Validierung empfohlen.
• Bei Immunpräzipitationsexperimenten (IP) kann der Antikörper andere Komplex-IV-Untereinheiten mitpräzipitieren; erwägen Sie die Verwendung milder Detergenzien, um die Integrität des nativen Komplexes zu erhalten.
• Die ELISA-Reaktivität kann zur quantitativen Detektion von COX5B in Zell- oder Gewebelysaten verwendet werden, aber die Leistung sollte mit bekannten Standards validiert werden.
• Die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte wurde bestätigt, aber überprüfen Sie aufgrund möglicher Sequenzvariationen immer die spezifische Speziesreaktivität in Ihrem eigenen experimentellen System.

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