Anti-Komplement C4A Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IF-P, ELISA - P0C0L4

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Komplement C4-A

• Komplement C4-A ist eine nicht-enzymatische Komponente des klassischen, Lektin- und GZMK-Komplementwegs und dient als Vorläufer, der proteolytisch aktiviert wird, um an der angeborenen Immunabwehr teilzunehmen.
• Nach Spaltung durch Komplementproteasen wie C1S, MASP2 oder GZMK entsteht C4b, das kovalent an Pathogenoberflächen bindet und als Opsonin fungiert, um Antigene zur Entfernung zu markieren. Verwandte Referenzen: PMID:8538770 PMID:27738201
• C4b rekrutiert anschließend Komplement C2b, um die C3- und C5-Konvertasen zu bilden, die C3 und C5 spalten und aktivieren und so die Komplementkaskade fortsetzen. Verwandte Referenzen: PMID:12878586 PMID:18204047 PMID:2387864
• Das C4a-Fragment, das während der Aktivierung freigesetzt wird, ist strukturell ähnlich wie Anaphylatoxine; seine Rolle bleibt jedoch unklar und frühere Berichte über eine Funktion als Entzündungsmediator könnten auf Verunreinigungen zurückzuführen sein. Verwandte Referenzen: PMID:6167582 PMID:25659340
• Komplement C4-A wird hauptsächlich von Hepatozyten sezerniert, mit der höchsten Expression in der Leber; eine extrahepatische Synthese in Geweben wie Nebenniere, Schilddrüse und Niere trägt zum lokalen Immunschutz bei. Verwandte Referenzen: PMID:11367523
• Subzellulär wird es in den extrazellulären Raum sezerniert und lokalisiert sich auch an Synapsen, neuronalen Axonen, Dendriten und Zelloberflächen.
• Das Protein durchläuft mehrere posttranslationale Modifikationen, einschließlich Disulfidbrückenbildung, Glykosylierung, Phosphorylierung und Sulfonierung, und enthält eine reaktive Thioesterbindung, die für die kovalente Bindung an Zieloberflächen unerlässlich ist.
• Es ist mit Krankheitsvarianten bei systemischem Lupus erythematodes assoziiert und trägt Blutgruppenantigen-Determinanten; mehrere Isoformen existieren aufgrund von alternatives Spleißen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht einem C-terminalen Fragment (aa 940-1237), was eine Isoformspezifität verleihen kann; die Kreuzreaktivität mit dem hochhomologen C4B sollte jedoch experimentell verifiziert werden.
• Für das Western Blotting verwenden Sie Polyacrylamidgele mit niedrigem Prozentsatz und verlängerte Transferzeiten, um das hochmolekulare Ziel (~193 kDa) effizient aufzutrennen und zu transferieren.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF-P) sollte, da C4A sezerniert wird und sich auf Zelloberflächen ablagern kann, die Fixierung und Permeabilisierung optimiert werden, um sowohl intrazelluläre als auch oberflächengebundene Proteine nachzuweisen.
• Für ELISA kann dieser Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden; Kombinieren Sie ihn mit einem anderen Klon, der ein nicht überlappendes Epitop anzielt, für die Entwicklung eines Sandwich-ELISA.
• Da eine Komplementaktivierung C4 verbrauchen kann, sollten Sie die Probenhandhabung und Lagerbedingungen berücksichtigen, um die nativen Proteinspiegel zu erhalten.

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