Anti-CLOCK Kaninchen-Polyklonale Antikörper für WB, ELISA – O15516

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CLOCK

• CLOCK (Circadian Locomotor Output Cycles Protein Kaput), auch bekannt als bHLHe8, ist eine Kernkomponente des molekularen zirkadianen Uhrwerks, das ~24-Stunden-Rhythmen der Genexpression, des Stoffwechsels und des Verhaltens antreibt (UniProt O15516).
• Als positiver Zweig des Transkriptions-/Übersetzungs-Rückkopplungskreises bildet CLOCK ein Heterodimer mit BMAL1 (oder BMAL2), um an E-Box-Elemente (5'-CACGTG-3') in Promotoren von zentralen Uhren-Genen (PER1/2/3, CRY1/2) und uhrgesteuerten Genen zu binden und dadurch die Transkription zu aktivieren.
• Das CLOCK-BMAL1-Heterodimer erkennt bevorzugt das 5'-CACGTGA-3'-Motiv, wobei CLOCK die 5'-CAC-3'-Halbstelle und BMAL1 die 5'-GTGA-3'-Halbstelle bindet; nicht-kanonische Motive 5'-AACGTGA-3' und 5'-CATGTGA-3' werden ebenfalls erkannt. Verwandte Referenzen: PMID:23229515
• CLOCK besitzt eine intrinsische Histon-Acetyltransferase-Aktivität, die eine zirkadiane Chromatin-Remodellierung durch Acetylierung von Histonen (z. B. H3, H4) und nicht-histonischen Proteinen, einschließlich BMAL1 selbst, ermöglicht; diese Aktivität ist für die Rhythmusgenerierung ebenso kritisch wie die Transkription.
• Es acetyliert Argininosuccinat-Synthase 1 (ASS1) auf zirkadiane Weise, was zu einer Hemmung der enzymatischen Aktivität und einer rhythmischen Kontrolle der Argininbiosynthese und der Ureagenese führt und dadurch die Uhr mit dem Stoffwechsel verbindet. Verwandte Referenzen: PMID:28985504
• CLOCK hemmt die Transkriptionsaktivität des Glukokortikoidrezeptors NR3C1/GR durch Acetylierung mehrerer Lysinreste in der Hinge-Region des Rezeptors und reduziert so seine Assoziation mit Glukokortikoid-Antwortelementen. Verwandte Referenzen: PMID:21980503
• Subzellulär ist CLOCK hauptsächlich im Kern lokalisiert, aber auch im Zytoplasma und Zytosol nachweisbar. Es ist weit verbreitet exprimiert, mit den höchsten Gehalten im Hoden und Skelettmuskel, und ist stark im suprachiasmatischen Kern (SCN) des Gehirns, der zentralen Uhr, angereichert.
• Posttranslationelle Modifikationen wie Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung passen die Stabilität und Aktivität von CLOCK fein an und tragen zur präzisen oszillatorischen Kontrolle zirkadianer Rhythmen bei.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 450–600 des humanen CLOCK, einer Region, die die Erkennung der Acetyltransferasedomäne sicherstellen und die Detektion sowohl des Volllängstproteins als auch potenzieller Isoformen unterstützen kann; erwägen Sie die Überprüfung der Reaktivität in der relevanten Spezies und Gewebeart.
• Für Western Blot beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht von CLOCK 95 kDa; jedoch können posttranslationelle Modifikationen (z. B. Phosphorylierung, Acetylierung) die beobachtete Bande verschieben. Verwenden Sie geeignete Blockierungs- und Detektionspuffer, die für kaninchen-polyklonale Antikörper optimiert sind.
• Stellen Sie für ELISA sicher, dass die Beschichtung mit rekombinantem Protein oder Peptid der Immunogenregion entspricht, um die Antikörperbindung zu maximieren. Titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Arbeitskonzentration in Ihrem Assaysystem zu bestimmen.
• Kreuzreaktivität wird für Mensch, Maus und Ratte angegeben; validieren Sie in Ihrem gewünschten Modellorganismus unter Verwendung von Positiv- und Negativkontrollen. Die Expression von CLOCK ist zirkadian, berücksichtigen Sie daher die Tageszeit der Probengewinnung bei der Untersuchung endogener Gehalte.

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