Anti-Cleaved PARP (Asp214) monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P09874

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PARP1-Funktion und -Lokalisierung

• PARP1 ist eine nukleäre Poly-ADP-Ribosyltransferase, die die Poly-ADP-Ribosylierung von Substratproteinen vermittelt und eine zentrale Rolle bei der DNA-Reparatur, Chromatin-Umgestaltung und Genomstabilität spielt (PubMed:17177976, PubMed:18055453, PubMed:18172500). Verwandte Referenzen: PMID:17177976 PMID:18055453 PMID:18172500
• Es katalysiert Serin-, Glutamat- und Tyrosin-verknüpfte ADP-Ribosylierung, wobei die Residuenspezifität durch die Cofaktoren HPF1 und NMNAT1 bestimmt wird (PubMed:28190768, PubMed:32028527, PubMed:29954836). Verwandte Referenzen: PMID:28190768 PMID:32028527 PMID:29954836
• Bei der DNA-Reparatur erkennt PARP1 Strangbrüche, rekrutiert Reparaturfaktoren und fördert die Chromatinentspannung, um die Basenexzisions- und Doppelstrangbruchreparatur zu erleichtern (PubMed:26344098, PubMed:30356214, PubMed:19344625). Verwandte Referenzen: PMID:26344098 PMID:30356214 PMID:19344625
• Während der Apoptose wird PARP1 durch Caspase-3 und -7 an Asp214 gespalten, wodurch ein großes katalytisches Fragment (∼89 kDa) entsteht, das in das Zytoplasma transloziert und als Poly-ADP-Ribose-Träger dient, was die AIFM1-vermittelte Apoptose auslöst (PubMed:33168626). Verwandte Referenzen: PMID:33168626
• Die subzelluläre Lokalisierung ist unter normalen Bedingungen überwiegend nuklear und nukleolär; nach der Spaltung verlagert sich das katalytische Fragment in das Zytoplasma.
• PARP1 unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung, ADP-Ribosylierung (Auto-Modifikation), Phosphorylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität und Interaktionen regulieren.
• Neben der DNA-Reparatur wirkt PARP1 bei der Transkriptionsregulation, der Replikationsgabelprogression, der Adipogenese und der angeborenen Immunität durch Modulation von Proteinaktivitäten und der Chromatinstruktur (PubMed:15607977, PubMed:22464733, PubMed:35460603). Verwandte Referenzen: PMID:15607977 PMID:22464733 PMID:35460603

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper zielt auf das Neo-Epitop bei Asp214; daher erkennt er spezifisch das gespaltene PARP-Fragment und nicht das Voll-Längen-PARP. Für den Western Blot behandeln Sie Zellen mit Apoptose-Induktoren (z.B. Staurosporin oder Etoposid), um das ∼89 kDa-Fragment anzureichern.
• Für die Immunfluoreszenz/ICC sollten Sie die Fixierung nach Apoptose-Induktion in Betracht ziehen, um die zytosolische Lokalisierung des gespaltenen Fragments zu beobachten. Validieren Sie die Färbespezifität in Ihrem experimentellen System mit geeigneten Kontrollen.
• Die Eignung für ELISA wurde berichtet; bei der Assay-Entwicklung sollten Sie die Verwendung von rekombinantem gespaltenem PARP-Fragment oder Peptid als Standard in Betracht ziehen und die Beschichtungs- und Detektionsbedingungen optimieren.

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