Anti-CHRNA1-Polyklonaler Antikörper für WB, IF, IHC, ELISA - P02708

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CHRNA1-Funktion und -Lokalisierung

• CHRNA1 kodiert die Alpha-Untereinheit des nikotinischen Acetylcholinrezeptors (AChR), ein ligandengesteuerter Ionenkanal, der die schnelle synaptische Übertragung an der neuromuskulären Endplatte vermittelt. Nach Bindung von Acetylcholin unterliegt der Rezeptor einer Konformationsänderung, die zur Öffnung des Kanals und zum Einstrom von Kationen führt.
• Das Protein ist auch unter mehreren Aliasnamen bekannt: ACHRA, ACHRD, CHRNA, CMS1A, CMS1B, CMS2A, FCCMS, SCCMS. Aufgrund alternativen Spleißens existieren zwei Isoformen: Isoform 1 ist skelettmuskelspezifisch, während Isoform 2 weitgehend im Gehirn, Herzen, in der Niere, Leber, Lunge und im Thymus exprimiert wird.
• CHRNA1 ist ein Mitglied der Familie der ligandengesteuerten Ionenkanäle, gekennzeichnet durch eine große N-terminale extrazelluläre Domäne, vier Transmembranhelices und eine zytoplasmatische Schleife. Es enthält Disulfidbrücken und Glykosylierungsstellen, die für die Rezeptorassembly und -funktion kritisch sind.
• Subzellulär befindet sich der AChR an der postsynaptischen Zellmembran, wo er an der neuromuskulären Endplatte clusterbildend auftritt. Eine korrekte Lokalisierung erfordert die Interaktion mit Rapsyn und anderen Gerüstproteinen.
• Mutationen in CHRNA1 sind mit kongenitalen myasthenen Syndromen (CMS) assoziiert, einschließlich CMS1A, CMS1B und CMS2A sowie dem Slow-Channel-kongenitalen myasthenen Syndrom (SCCMS). Diese Mutationen verändern die Kanalkinetik, die Rezeptorexpression oder die Agonistenaffinität.
• Das zur Erzeugung dieses Antikörpers verwendete Immunogen entspricht den Aminosäuren 105-220 des menschlichen CHRNA1-Proteins, was innerhalb der extrazellulären Domäne liegt. Diese Region erkennt wahrscheinlich beide Isoformen und ist zwischen Mensch und Maus konserviert, was eine Kreuzreaktivität ermöglicht.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen N-verknüpfte Glykosylierung und die Bildung von Disulfidbrücken, die für die Faltung und Stabilität wichtig sind. Das Protein hat ein berechnetes Molekulargewicht von ~52 kDa, was mit der beobachteten Bande im Western-Blot übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser polyklonale Antikörper wurde in Kaninchen gegen ein rekombinantes Fragment (aa 105-220) hergestellt. Für den Western-Blot wird eine Bande um 52 kDa in Lysaten aus menschlicher und muriner Skelettmuskulatur erwartet; erwägen Sie die Verwendung von reduzierenden Bedingungen und einem geeigneten Blockierungspuffer, um unspezifische Bindungen zu minimieren.
• Für die Immunpräzipitation kann die Erkennung eines extrazellulären Epitops durch den Antikörper von Vorteil sein; jedoch wird eine Validierung im entsprechenden Zell-/Gewebesystem empfohlen.
• In der Immunfluoreszenz und Immunhistochemie sollten optimale Fixierungs- und Permeabilisierungsmethoden empirisch ermittelt werden, da sich das Epitop in der extrazellulären Domäne befindet, die empfindlich gegen Überfixierung sein kann. Verwenden Sie geeignete Kontrollen wie Knockout-Zelllinien oder blockierende Peptide.
• Für ELISA kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsantikörper verwendet werden; Titrieren Sie, um die optimale Arbeitskonzentration zu bestimmen.

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