Anti-ChAT Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - P28329

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von ChAT

• Cholin-O-Acetyltransferase (ChAT) ist auch unter den Aliassen CHOACTASE, CMS6, CMS1A und CMS1A2 bekannt.
• Sie katalysiert die reversible Synthese von Acetylcholin (ACh) aus Acetyl-CoA und Cholin an cholinergen Synapsen, ein zentraler Schritt der cholinergen Neurotransmission.
• ChAT wird stark in cholinergen Neuronen des zentralen und peripheren Nervensystems exprimiert und ist an präsynaptischen Terminals lokalisiert.
• Alternatives Spleißen des CHAT-Gens erzeugt mehrere Transkriptvarianten, die möglicherweise Enzymaktivität oder Regulation beeinflussen.
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, wurden identifiziert, obwohl ihre funktionelle Auswirkung noch untersucht wird.
• Mutationen in CHAT sind mit der kongenitalen myasthenen Syndrom (CMS) verbunden, einer Gruppe von Erkrankungen, die durch eine gestörte neuromuskuläre Übertragung gekennzeichnet sind.
• Das Protein hat ein vorausgesagtes Molekulargewicht von etwa 83 kDa, was mit der validierten Beobachtung des Produkts im Western Blot übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Die Immunogen-Sequenz (Aminosäuren 649‑748) liegt in einer Region, die bei Mensch, Maus und Ratte hochkonserviert ist, was die breite Kreuzreaktivität erklärt. Berücksichtigen Sie dies bei der Analyse von Ergebnissen über verschiedene Arten hinweg.
• Für den Western Blot führen Sie die Proben unter reduzierenden Bedingungen auf und erwarten Sie eine spezifische Bande nahe 83 kDa. Verwenden Sie eine niedrigfluoreszierende PVDF-Membran für optimale Detektion.
• In ELISA-Protokollen kann dieser Antikörper sowohl als Capture- als auch als Detektionsreagenz verwendet werden; titrieren Sie ihn sorgfältig gegen rekombinantes ChAT-Protein oder native Gewebslysate.
• Führen Sie die Blockierung mit 5% fettfreier Milch oder BSA in TBST durch und inkubieren Sie den Primärantikörper über Nacht bei 4°C für das beste Signal-Rausch-Verhältnis.
• Validieren Sie den Antikörper immer in Ihrer spezifischen Probenmatrix (z. B. Gehirnhomogenat, Nerventerminal-Präparationen) vor quantitativen Assays.

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